CRISPR Cas9基因敲除技术原理与应用.pdfVIP

敲除（CRISPR/Cas）

1.实验原理

CRISPR/Cas9是一种新型的组编辑技术，拥有操作简单，效率高，以及作用靶点多

等优势，逐渐成为敲除，组突变和敲除等实验的操作工具。Cas9系统能

在293T,K562,iPS等多种细胞中，进行有效的靶向酶切，进而非同源重组（NHEJ）或

同源重组（HR），效率在3-25%之间。

在向导RNA（guideRNA，gRNA）和Cas9蛋白的参与下，待编辑的细胞组将

被看作或外源，被精确剪切。如果在的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，

向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码的质粒一同转入细胞中，向导RNA通过碱基互

补配对可以靶向PAM附近的目标序列，Cas9蛋白会使该上下游的双链断裂。而生

物体自身存在着损伤修复的应答机制，会将断裂上下