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双向凝胶电泳实验报告

一、实验材料与仪器准备

（一）实验材料

样本来源：本次实验选取的是经过低温诱导处理48小时的小鼠肝脏组织样本。实验前，将小鼠处死后迅速取出肝脏，用预冷的生理盐水冲洗去除血液残留，随后切成约1cm3的小块，放入液氮中速冻，转移至-80℃冰箱保存备用。

试剂选择

蛋白质提取试剂：采用含7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS（3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸）、65mmol/LDTT（二硫苏糖醇）和1%蛋白酶抑制剂混合物的裂解液，用于充分裂解细胞并保持蛋白质的溶解性。

电泳相关试剂：丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、甘氨酸、SDS（十二烷基硫酸钠）、过硫酸铵（APS）、TEMED（四甲基乙二胺）等均为电泳级纯品；IPG（固定化pH梯度）干胶条（pH3-10NL，17cm）购自GEHealthcare公司；考马斯亮蓝R-250用于凝胶染色。

其他试剂：三氯乙酸（TCA）、丙酮用于蛋白质沉淀纯化；碳酸氢铵用于酶解过程；乙腈用于肽段提取。

（二）实验仪器

蛋白质提取与纯化设备：高速冷冻离心机（Eppendorf5810R）、超声破碎仪（SCIENTZ-IID）、超低温冰箱（ThermoFisherScientific）。

双向电泳设备：等电聚焦仪（GEHealthcareEttanIPGphor3）、垂直