卫生棉条阴道酵母菌感染动物模型接种后灌洗取样作业指导书.docVIP

卫生棉条阴道酵母菌感染动物模型接种后灌洗取样作业指导书

一、实验前准备

（一）实验动物选择与预处理

动物品系与规格：优先选用6-8周龄、体重在20-25g之间的雌性SPF级BALB/c小鼠，该品系小鼠免疫状态稳定，对白色念珠菌等酵母菌的易感性较强，且个体差异较小，适合构建标准化的感染模型。也可根据实验需求选用SD大鼠，但需调整后续接种剂量和灌洗参数。

动物适应性饲养：实验动物购入后，需在温度22-25℃、相对湿度40%-60%、12小时明暗交替的SPF级动物房内适应性饲养3-7天。期间给予无菌饲料和灭菌水，每日观察动物的饮食、活动及阴道分泌物情况，排除存在先天生殖系统疾病或感染的个体。

动物发情周期同步化处理：为提高感染模型的一致性，需对雌性小鼠进行发情周期同步化处理。可采用苯甲酸雌二醇皮下注射法，每只小鼠按0.1mg/kg体重的剂量注射，注射时间为感染前48小时。苯甲酸雌二醇能够模拟雌性动物发情期的激素水平，使阴道上皮细胞角质化，有利于酵母菌的黏附和定植。

（二）实验试剂与器材准备

试剂配制

白色念珠菌悬液制备：从-80℃冰箱取出保存的白色念珠菌标准菌株（如ATCC10231），接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）平板上，37℃恒温培养24-48小时。挑取单个典型菌落接种于沙氏葡萄糖液体培养基中，37℃、200rpm振荡培养16-18小时。培养结束后，将菌液于4℃、3000rp