丁香假单胞菌dc3000乙酰羟酸合酶的制备和检测.docx

摘要

乙酰羟酸合酶（AHASs）是由植物、微生物合成的一类叶绿体酶，是支链氨基酸(BCAAs)合成途径中的第一个关键酶，而支链氨基酸是人体必需氨基酸，对人体的合成分解代谢有重要作用。因此，高效制备活性良好的AHAS有巨大的应用前景和研究意义。

本文通过克隆丁香假单胞菌DC3000中乙酰羟酸合酶大亚基基因ilvB,通过构建PS.BL21(DE3)pET-28a(+)-AHAS-RSU工程菌，用IPTG诱导表达重组蛋白，镍离子亲和层析柱纯化蛋白，得到了浓度1.77mg/mL,活性良好的AHAS。本实验旨在构建稳定的、能够表达活性良好的AHAS的重组质粒。

2.1实验材料与仪器

2.1