选修31基因工程课件高考一轮复习生物.pptVIP

角度3.如何构建基因表达载体?提示:用同种限制酶切割目的基因和载体,获得相同的黏性末端,然后用DNA连接酶连接目的基因和载体,得到的重组DNA分子即为基因表达载体。【典例示范】(2018·全国卷Ⅱ)某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因(简称为甲),并将其插入质粒P0,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切位点的示意图如下,图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题:(1)据图推断,该团队在将甲插入质粒P0时,使用了两种限制酶,这两种酶是______________。使用这两种酶进行酶切是为了保证__________,也是为了保证__________________。?(2)将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后,若在该细胞中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了______________和________________过程。?(3)为了获得含有甲的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的__________________移入牛的____________________中、体外培养、胚胎移植等。?(4)为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方