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高中三年级生物基因工程与生物安全知识清单

一、基因工程的基本工具

（一）【核心概念】限制性内切核酸酶——基因的“手术刀”

1、来源与作用：主要来源于原核生物，能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并在识别序列内部或附近切开DNA链。其作用是切断磷酸二酯键。

2、【高频考点】识别序列特点：绝大多数限制酶识别序列呈回文对称结构（palindrome），即两条链中的核苷酸序列从5’→3’端读序相同。例如，EcoRI识别的序列是5‘GAATTC3’，其互补链为3‘CTTAAG5’，从5’→3’端读也是GAATTC。

3、切割方式与末端类型：

▲平末端：在识别序列的中心轴线处切割，产生无单链突出的末端。如SmaI。

★黏性末端：在识别序列的两侧切割，产生具有短单链突出序列的末端。根据突出方向，又分为5‘突出黏性末端（如EcoRI）和3’突出黏性末端（如PstI）。黏性末端通过碱基互补配对容易重新连接。

（二）【核心概念】DNA连接酶——基因的“针线”

1、【重要】功能：催化形成磷酸二酯键，将两个DNA片段连接起来。它不能连接单独的单链，只能连接双链DNA片段中的缺口。

2、两类DNA连接酶的对比：

E.coliE.coliDNA连接酶：来源于大肠杆菌，只能连接黏性末端。

▲T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体，既能连接黏性末端，也能连接