蛋白质的提取与分离纯化——生化实验设计讲解课件讲解学习.pptVIP

文献查得：钙调蛋白（CaM)是由148个氨基酸组成的单链分子,其pI值在3.9-4.1之间,分子量约为17KDa.该蛋白能够耐一定的高温，在90oC加热3-4min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白分子中含有较多的疏水性残基，与Ca2+结合后可以暴露出它的疏水基团。整个实验过程一般可分为5个阶段：①材料的选择和预处理②细胞的破碎（有时需进行细胞器的分离)③提取④纯化（包括等电点沉降法，盐析，有机溶剂沉淀，吸附、层析、等)⑤分析鉴定。一、材料的选定：大鼠脑组织预处理：将切取的组织用4℃预冷的0.01mol/l的PBS漂洗去血渍，再用滤纸吸干残留的PBS（磷酸盐缓冲液)。实验步骤:二、a细胞的破碎⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎)②高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片)，宜用于动物内脏组织的破碎⑵物理方法主要通过各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法。Ⅰ反复冻融法Ⅱ冷热变替法Ⅲ超声波法⑶化学及生物化学方法玻璃匀浆机b、细胞器的分离细胞器的分离一般采用差速离心法。细胞经过破碎后,在适当介质中进行差速离心。