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分子生物学第五章分子生物学的常规技术从核酸提取到基因编辑——系统掌握现代分子生物学核心研究方法

Contents本章内容概览分子生物学常规技术体系——从核酸操作到前沿基因编辑的系统方法01核酸的提取、纯化与定量02PCR技术体系与衍生方法03核酸电泳与分子印迹技术04基因克隆、载体构建与文库05高通量检测与组学技术06蛋白质互作与基因编辑前沿

CHAPTER01核酸的提取、纯化与定量一切分子生物学实验的起点——从细胞中获取高质量核酸

MOLECULARBIOLOGY·CHAPTER05核酸提取的总论原则与质量控制核酸提取是所有分子生物学实验的第一步，其核心逻辑是裂解-去杂-纯化三步法。提取质量直接决定后续PCR、测序等全部下游实验的成败。裂解阶段：通过SDS/蛋白酶K破坏细胞膜与核膜释放核酸，RNA提取额外使用强变性剂（如异硫氰酸胍）抑制RNase活性去杂阶段：利用酚-氯仿抽提去除蛋白质，或通过硅胶膜吸附柱特异性结合核酸实现快速纯化，后者已成为主流方法纯度评估：紫外分光光度法，A260/A280比值DNA应为1.8、RNA应为2.0，偏低提示蛋白污染，偏高提示RNA降解或盐残留完整性检测：琼脂糖凝胶电泳，基因组DNA应呈单一条带，RNA应清晰可见28S和18SrRNA条带且亮度比约2:1实验室核酸提取操作场景

不同类型核酸的提取策略基因组DNA、质粒DNA