细胞冻存与复苏操作及事项.pdfVIP

细胞复苏经验总结

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将

细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为些参考。

【材料】

1.常规细胞培养仪器设备恒温水浴振荡器。

2.培养液（DMEM）胎牛（CBS）二甲基亚砜（DMSO）

【操作程序】

1.细胞进行常规，紫外照射40min以上。

2.培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱370C预热20min，备用。

3.二甲基亚砜（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，备用。

4.从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

5.将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6.用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

7.记录复苏日期。

【注意事项】

1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解

冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致。

2.冻存液的问题：冻存