实验室细胞培养规程汇报.pptVIP

细胞培养汇报孙雁斌

一.原代培养二.传代培养三.胰蛋白酶处理分离细胞四.细胞的冻存五、冻存细胞的复苏六.MTT法检测细胞活力七.常见的细胞染色法

一、原代培养由体内取出组织或细胞进行的首次培养离体时间短遗传性状和体内细胞相似适于做细胞形态、功能和分化等研究 第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养,持续1一4周组织块培养和分散细胞培养

组织块培养将组织剪成1mm3左右的组织块用PBS缓冲液清洗组织块3次将组织块按照一定间距转入培养瓶内 轻轻将培养瓶翻转过来，将适量培养液加到非细胞生长面上，注意翻瓶时勿令组织小块流动，塞好瓶塞置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时)，使小块微干涸 从温箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培

养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块置温箱中静止培养6.待细胞从组织块游出量增后,再补加培养液

分散细胞培养 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 处理组织：把组织块置于烧杯中，用PBS漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 剪切：将组织剪切成2~3毫米大小的块，加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，倒入三角烧瓶中