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2026年疫苗制品工(实操技能)试题及答案

一、实操简答题（共4题，每题15分，合计60分）

1.请简述重组蛋白疫苗生产中CHO细胞复苏的标准操作要点及关键参数控制阈值，依据《中国药典》2025年版三部及2025版GMP要求作答。

参考答案：（1）前期准备：提前将无血清CHO细胞专用培养基置于37℃水浴预热30min，准备15mL无菌离心管、75%酒精棉球，生物安全柜提前紫外消毒30min，验证负压差值≥10Pa、空气洁净度A级合格。（2）复苏操作：从液氮罐气相层取出CHO工作种子细胞冻存管（细胞代次≤P15，冻存密度5×10^6cells/mL），立即置于37℃恒温水浴振荡器中120次/min振荡，1min内完成解冻，确保冻存管内无残留冰晶。用75%酒精全面擦拭冻存管外壁2次后转移至生物安全柜内，将细胞悬液缓慢滴加至装有10mL预热培养基的离心管中，轻柔吹打8-10次混匀后，1000g离心5min去除冻存保护剂（二甲基亚砜）。（3）接种培养：弃上清，用10mL预热培养基重悬细胞，取样用台盼蓝染色法检测细胞活率，要求活率≥90%，按1×10^6cells/mL的密度接种至方瓶或种子生物反应器中，培养参数设置为：温度37℃、pH7.1±0.1、溶氧50%±5%、搅拌转速60rpm（5L悬浮培养体系），培养24h后取样观察细胞形态、测定细胞密度，当密度达到4×10^6cells/mL