大肠杆菌感受态细胞专家讲座.pptVIP

大肠杆菌感受态细胞制备、重组DNA转化、克隆筛选大肠杆菌感受态细胞专家讲座第1页

1.试验目标和要求经过本试验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞技术以及筛选转化体技术。了解细胞转化概念及其在分子生物学研究中意义。大肠杆菌感受态细胞专家讲座第2页

2.相关知识及原理感受态细胞(Competentcells):受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法)处理后，细胞膜通透性发生改变，成为能允许多有外源DNA载体分子经过感受态细胞(competentcell)。大肠杆菌感受态细胞专家讲座第3页

转化（transformation)：是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞取得新遗传性状一个伎俩，是基因工程等研究领域基本试验技术。进入细胞DNA分子经过复制表示，才能实现遗传信息转移，使受体细胞出现新遗传性状。转化过程所用受体细胞普通是限制－修饰系统缺点变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶突变株。大肠杆菌感受态细胞专家讲座第4页

转化方法：化学方法(热击法)；使用化学试剂（如CaCl)制备感受态细胞，经过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞；电转化法：使用低盐缓冲液或水洗制备感受态细胞，经过高压脉冲作用将载体DNA分子导入受体细胞。大肠杆菌感受态细胞专家讲座第5页

克隆筛选：主要用不一样抗生素基因筛选。