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DPPH自由基清除能力实验测定方法

一、实验原理与意义

DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在517nm波长处有强烈吸收。当存在自由基清除剂时，DPPH自由基的单电子被配对，溶液颜色逐渐变浅，吸光度随之降低。这种颜色变化与清除剂的浓度和抗氧化能力呈线性关系，因此可以通过测定吸光度的变化来评估样品对DPPH自由基的清除能力。

该方法广泛应用于天然产物、食品添加剂、化妆品等领域的抗氧化活性评价，具有操作简便、快速、重复性好等优点。与其他抗氧化实验方法相比，DPPH法无需复杂的仪器设备，且反应条件温和，能够在室温下进行，适合大规模样品筛选。

二、实验材料与仪器

（一）材料

DPPH试剂：分析纯，购自Sigma-Aldrich等化学试剂公司。使用前需用无水乙醇配制成0.1mmol/L的溶液，避光保存，现用现配。

样品：根据实验目的选择合适的样品，如植物提取物、食品提取物、抗氧化剂等。固体样品需用适当溶剂（如乙醇、甲醇、水等）溶解，配制成不同浓度的溶液；液体样品可直接稀释或使用。

阳性对照：常用的阳性对照包括维生素C（Vc）、维生素E（Ve）、BHT（二丁基羟基甲苯）等，用于验证实验体系的可靠性。

溶剂：无水乙醇、甲醇、蒸馏水等，均为分析纯。

（二）仪器

紫外-可见分光光度计：用于测定溶液在517nm波长处的吸光度，如岛津UV-2600、安捷