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CRISPR-Cas9切割效率试验规范

1范围

本规范规定了CRISPR-Cas9系统体外及细胞内切割效率检测的试验流程、操作要求、质量控制标准及结果判定方法，适用于科研场景下sgRNA活性预评估、基因编辑体系优化、临床级编辑工具安全性验证等场景，涵盖单靶点切割、多靶点同时编辑、碱基编辑器衍生体系效率检测等多种应用需求。本规范不适用于体内基因编辑治疗的临床级效能验证，相关临床场景需结合监管部门发布的特定技术指南执行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T37873-2019基因编辑产品质量控制通用要求

ISO20395:2019生物技术基因编辑核酸酶活性测定方法

《人基因编辑治疗产品研发与评价技术指导原则（试行）》2023年版

NCBIPubMed人类参考基因组GRCh38.p14序列比对标准

3术语、定义和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

CRISPR-Cas9：成簇的规律间隔的短回文重复序列相关蛋白9，是一种依赖向导RNA（sgRNA）靶向识别特定DNA序列并实现双链切割的核酸酶系统。

sgRNA：单链向导RNA，由crRNA和tracrRNA融合而成，包含20nt左右的靶序列互补区及