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光遗传学刺激光强阈值试验规范

1.试验前准备

1.1试验对象准备

动物模型选择：根据研究目标选择合适的动物品系，常用包括C57BL/6小鼠、SD大鼠、非人灵长类等，需确保动物遗传背景一致，周龄、体重符合试验要求，健康状况良好，无神经系统疾病史。

病毒转染：选择特异性启动子驱动的光敏感蛋白表达病毒，如CaMKIIα启动子靶向兴奋性神经元、GFAP启动子靶向星形胶质细胞、PV启动子靶向小白蛋白阳性中间神经元。病毒注射需严格定位脑区坐标，参照脑图谱确定前囟后、旁开、腹侧深度参数，注射体积控制在0.5-2μL，注射速度0.1μL/min，注射后留针5-10min防止病毒反流。

光纤植入：病毒表达2-4周后进行光纤植入手术，光纤直径通常选择200μm、数值孔径0.37，植入深度较病毒注射位点浅0.2-0.5mm，用牙科水泥将光纤套管固定在颅骨表面，术后给予7天抗生素预防感染，恢复2周后开展试验。

表达验证：试验结束后需处死动物，制备脑切片，通过免疫荧光染色验证光敏感蛋白的表达位置、表达效率及特异性，排除表达位置偏差或表达效率不足的样本。

1.2试验设备校准

光源校准：使用功率计在光纤输出端校准不同驱动电流对应的光功率，校准范围覆盖0.1-100mW，每个电流点重复测量3次取平均值，绘制电流-光功率标准曲线，确保光强输出误差小于5%。

光路检查：检查光纤是否存在弯折、破损、端面污染等情况