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RNA干扰实验

一、磷酸钙转染法

【实验原理】

磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法。磷酸

钙有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过

胞饮作用进入靶细胞，被转染的DNA可以在细胞内进行瞬时表达，也可整合到靶细胞的

染色体上从而产生不同基因型和表型的稳定克隆。该方法可广泛用于转染许多不同类型的

细胞。

【仪器、材料和试剂】

（一）仪器、用具

CO2培养箱、10cm细胞培养平板、巴斯德吸管、微量移液器、15ml锥形管、烧杯、量

筒等。

（二）材料

呈指数生长的真核细胞BALB/c3T3

CsCl纯化的表达质粒DNA

（三）试剂

1．完全培养液

DMEM90ml

FCS10ml

2．2MCaCl2，过滤除菌，-20℃保存备用

3．2×HEBS(g/500ml)

NaCl8.0

KCl0.38

Na2HPO4.7H2O0.19

HEPES5.0

葡萄糖1.0

用NaOH调pH至6.95，过滤除菌后，-20℃保存备用。

【方法与步骤】

1．在10cm的培养板上接种1×106个BALB/c3T3