PCR实验技术操作指南讲义 聚合酶链式反应%28PCR%29基本操作步骤.pdfVIP

聚合酶链式反应（PCR）

聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA

片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由（1）高温变性模板；

（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，

使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置高温下（通常为

93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分

别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的

长短；耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目

的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。

PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起

始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，

PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用于基因的

分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，

基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤