DNA实验技术操作指南讲义 动物基因组DNA的提取.pdfVIP

动物基因组DNA的提取

[实验原理]

在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺

乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150kb，适用于L嘴菌体构建基

因组文库和Southern分析。

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA

的琼脂糖凝胶电泳技术。

[仪器、材料与试剂]

(一)仪器

1.台式离心机

2.玻璃匀浆器

3．高压灭菌锅

4．恒温水浴

(二)材料

1．1.5mL微量离心管

2．微量取样器和吸头

3．无菌过滤器(一次性)

4．10mL注射器

5．鼠肝

6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)

7.十二烷基硫酸钠(SDS)

8．乙二胺四乙酸(EDTA)

9．蛋白酶K

10．RNA酶

11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物

(三)试剂

1、1.5mol／LNaCl

2、0.5mol／LTris·HCIpH8.0

3．0.5mol／LEDTApH8.0

4．3mol／LNaAcpH5.2

以上均高压灭