流式细胞仪技术.pptVIP

设门的意义细胞类型或亚型的鉴定特殊蛋白质的分析细胞的分选细胞分选前后示意图标本来源:外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤)制成单细胞悬液标本浓度：106/ml-外周血白细胞计数，白血病人血标本需PBS稀释抗凝剂：EDTA.肝素-若抗凝不佳，有凝块，则不可检测。溶血剂：保持细胞形态、红细胞裂解完全。反应温度：26～27oC，室温避光。细胞处理：样品处理的要求细胞处理:细胞固定和膜通透,抗体滴度检测细胞内的细胞因子表达，细胞必须在穿透细胞膜前被固定，以维持细胞的结构完整性；细胞固定选用70%乙醇4%(w/v)paraformaldehyde(中性pH,PBS缓冲液);细胞穿透选用去污剂0.2%TritonX-100;应用抗体标记的缓冲液含代谢抑制剂叠氮钠(0.09%w/v)，抑制抗体结合引起的细胞膜蛋白的再分布由于荧光素结合抗体容易产生高水平的非特异背景信号，最好预先测定最佳抗体浓度，否则存在假阳性流式细胞仪检测的生物学意义免疫细胞的鉴定及表型分析细胞表面蛋白质及细胞内因子含量的测定细胞周期的分析免疫细胞的鉴定及表型分析免疫表型:利用荧光染料标记抗体识别细胞抗原，识别细胞亚群的标志。白细胞簇分化抗原(ClusterDifferentiationAntigen,CD)系统