基因定点突变技术培训讲学.pptVIP

“”基因定点突变技术定点突变的目的基因定点的突变是指按照设计的要求,使基因的特定序列发生插入、删除、置换和重排等变异。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间关系的有力工具。蛋白质的结构决定其功能,对某个已知基因的特定碱基进行定点改变,缺失或者插入,可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构和功能,改造酶的不同活性或者动力学特性。寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物,在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。盒式突变是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段,取代野生型基因中的相应序列。PCR介导的基因突变定点突破的方法寡核苷酸介导的定点突变寡聚核苷酸定点诱变技术是由加拿大的生物化学家(michaelsmith)发明的.寡核苷酸定点突变基本原理合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物,使其与带有目的基因完全互补。合成的寡核苷酸引物除短的错配区外,与目的基因完全互补。然后用DNA聚合酶使寡核苷酸引物延伸,完成单链DNA的复制。由此产生的双链DNA,一条链为野生型亲代链,另一条为突变型子代链。将获得的双联分子通过转导入宿主细胞,并筛选出突变体其中基因已被定向修改盒式突变1985年Wells提出的一种基因修饰技术—盒式突变。盒式突变:用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基