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（新）结核T细胞斑点试验(2篇）

第一篇

结核T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是基于细胞免疫反应的结核感染检测技术，通过识别结核分枝杆菌特异性抗原刺激下T细胞分泌的γ干扰素（IFN-γ），实现对结核感染的精准判断。该技术自2001年应用于临床以来，已成为潜伏性结核感染（LTBI）筛查、活动性结核辅助诊断及免疫抑制人群结核检测的核心工具，其特异性与敏感性显著优于传统方法。

一、技术原理与操作流程

T-SPOT.TB的核心原理是利用结核分枝杆菌特有的早期分泌抗原靶6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）作为刺激原——这两种抗原不存在于卡介苗（BCG）及多数非结核分枝杆菌（NTM）中，因此具有高度特异性。当外周血单核细胞（PBMC）与上述抗原共同孵育时，感染结核分枝杆菌的机体中存在的记忆T细胞会被激活，分泌IFN-γ；通过酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测IFN-γ分泌细胞的数量，即可判断是否存在结核感染。

具体操作流程包括：1.样本采集：采集5-10ml肝素抗凝静脉血，4-8小时内处理以保证细胞活力；2.PBMC分离：采用密度梯度离心法分离PBMC，调整细胞浓度至2×10?/ml；3.抗原刺激：将PBMC接种到预包被抗IFN-γ抗体的微孔板，分别加入ESAT-6、CFP-10抗原（试验孔）、无抗原（阴性对照）及植物血凝素（PHA，阳性对照）；4.孵育：37℃、