基因工程目的基因的分离和获得和重组基因的导入.pptVIP

基因工程目的基因的分离和获得和重组基因的导入;目标基因克隆三大战略：

1.利用PCR技术或化学合成法体外直接合成目标基因，然后将之克隆、表示;

2.构建感兴趣生物个体基因组文库或cDNA文库;

3.利用基因差异表示取得目标基因。;基因分离和取得常见方法;一、基因分离物理方法

依据DNA分子两条链存在着G≡C，A=T碱基配对。

如DNA分子中某段G≡C碱基对含量高，则其热稳定性就高，其溶解温度（Tm)就高。这么，大家经过控制溶解温度使富A=T区解链变性，而富G≡C区仍维持双链。

当利用单链核酸酶S，酶去除解开单链个别，得到富G≡C区DNA片段。;二、鸟枪法(Shotgun)又称霰弹法;鸟枪法克隆目标基因基础战略;三、基因文库法;构建基因文库意义

;几个物种基因组大小及基因数目

;构建基因组文库应满足条件;比如，某一哺乳动物基因组G=3x109bp，以17kb随机片段克隆构建文库中，使任一给定DNA序列达99％概率出现，则:

N＝ln(1-0.99)／ln[1一(17x103／3x109)=8.1x105

?????假如克隆片断长为20kb，则N=6.5X105

果蝇基因组约1.5X108bp，以20kb克隆时，N=4X105;基因组文库构建;;DNA不完全酶解;用DNA随机片断克隆法来:机械剪切和个别酶切

;;;DNA分子