（共25页PPT）第18讲第三章第五节核酸分子杂交技术.pptVIP

湖南师范大学生命科学学院第18讲核酸分子杂交技术基因工程第三章目的基因的制备与鉴定湖南师范大学生命科学学院袁婺洲3.1从获取目的基因3.2PCR技术获取与扩增目的基因3.3从基因组数据库获取目的基因3.4通过蛋白质工程改建目的基因3.5转化体中目的基因的鉴定本章目录第五节目的基因的鉴定遗传表型检测法酶切电泳检测核酸分子杂交PCR鉴定DNA序列测定三、核酸分子杂交检测根据两条单链DNA或DNA与RNA中互补碱基专一配对的原理，利用已标记的目的基因的一段特异序列作探针，与转化子受体细胞中基因组DNA进行同源性杂交，通过杂交信号的检测确定目的基因是否进入受体细胞基因组的方法。1、杂交探针的制备探针必须满足下列条件：单链结构（双链DNA可用碱变性）足够长度（至少12个碱基，一般300-500bp）不含互补区探针的标记同位素标记：32P、35S非放射性标记：探针接抗原，抗体带有酶或荧光素荧光素间接标记的原理生物素与地高辛间接标记辣根过氧化物酶HRP，DAB底物产棕色，4-氯-1-萘酚/H202底物产蓝色2、SouthernBlot又称DNA印迹技术，South