蛋白质的提取与分离纯化——生化实验设计讲解课件_2.pptVIP

精选可编辑ppt*生化实验设计——蛋白质的提取与分离纯化主讲人:第三组组员:华中师范大学化学学院精选可编辑ppt*已知某蛋白的分子量约为17kDa，等电点3.9~4.1，它能耐一定的高温，在90?C加热3~4min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白含有较多的疏水性残基，与Ca2+结合后可以暴露它的疏水基团。该蛋白的作用是作为生物体内酶的激活剂。请设计一个从脑组织中提取和分离纯化该蛋白的实验方案，要求写出具体的步骤和理由，以及检测方法。精选可编辑ppt*文献查得：钙调蛋白（CaM)是由148个氨基酸组成的单链分子,其pI值在3.9-4.1之间,分子量约为17KDa.该蛋白能够耐一定的高温，在90oC加热3-4min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白分子中含有较多的疏水性残基，与Ca2+结合后可以暴露出它的疏水基团。精选可编辑ppt*整个实验过程一般可分为5个阶段：①材料的选择和预处理②细胞的破碎（有时需进行细胞器的分离)③提取④纯化（包括等电点沉降法，盐析，有机溶剂沉淀，吸附、层析、等)⑤分析鉴定。精选可编辑ppt*一、材料的选定：大鼠脑组织预处理：将切取的组织用4℃预冷的0.01mol/l的PBS漂洗去血渍