《基因工程制》PPT课件.pptVIP

第五节基因工程菌的稳定性基因工程菌在传代过程中会出现质粒不稳定现象,包括分裂不稳定和结构不稳定。质粒不稳定产生的原因：1.含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率2.含质粒和不含质粒菌的比生长速率差异的大小3.细胞中所含质粒载体的拷贝数：拷贝数差别不大时，质粒载体相对地稳定;拷贝数相差悬殊，则很容易造成一些细胞丢失质粒，并逐渐发展为优势群体。???4.宿主细胞DNA重组系统的作用：质粒载体之间发生重组会形成二聚体、三聚体，甚至四聚体等所谓的质粒寡聚体，其稳定性比单体差。质粒载体中外源DNA片段的大小同质粒寡聚化的程度也密切相关5.质粒的拷贝数除与工程菌本身的特性有关外，还与培养条件有关。

含低拷贝质粒数的工程菌产生不含质粒子代菌的频率大,增加拷贝数能提高质粒的稳定性含高拷贝质粒数的工程菌产生不含质粒子代菌的频率较低,但大量外源质粒的存在使含质粒菌的比生长速率明显低于不含质粒菌,而不含质粒菌一旦产生,能较快取代含质粒菌而成为优势菌,所以对这类菌不能简单地采取提高质粒拷贝数的方法。

高拷贝质粒菌中质粒拷贝数增加与产物增加往往不成正比,这可能是含高拷贝质粒菌中,蛋白合成的限速步骤是转录和翻译,基因的大量复制加重了转录和翻译的负担,使得蛋白质合成速度变慢。质粒稳定性的分析方法:工程菌涂布不含抗性平板随机挑取100个菌落稀释10~12h接种含抗性的平