生物技术概论-细胞工程.pptVIP

.*6)目的基因的表达整合鉴定和检测从假孕母鼠产下的幼鼠尾尖提取DNA，用PCR、Southernbolt(DNA印迹)、FLSH(荧光原位杂交)等方法在染色体及基因水平上进行整合鉴定，并通过Northernblot(RNA印迹)和Westernblot（蛋白质印迹)等方法在转录及蛋白质水平上进行表达检测。经检测获得阳性Founder小鼠（首建鼠)。.*7)建系将阳性Founder小鼠与同一品系的正常小鼠交配，检测F1代仔鼠的阳性率，当繁殖到阳性率为50%左右时，即基本上可以判断出外源目的基因为单一位点的整合。经扩大繁殖，从中选择外源目的基因表达效果好、适应性好的转基因小鼠进行近亲繁殖。然后从子代中选择理想的纯合子个体进行全同胞兄妹交配，建立遗传基因小鼠近交系。.*逆转录病毒具有高效感染和在宿主细胞DNA上高度整合的特性。因此,利用逆转录病毒作为目的基因载体,通过感染早期胚胎细胞实现基因转移,产生嵌合体动物(chimericanimal),再经过杂交、筛选即可获得转基因动物。7.1.2逆转录病毒感染法.*1)逆转录病毒载体的构建常以禽类和鼠类的逆转录病毒为载体。其构建步骤包括：①提取病毒未整合的环状DNA。②将环状DNA克隆到适当的载体中。③选择适当的酶将病毒结构蛋白编码区切除，如构建