金丝桃苷对正常小鼠免疫功能的影响.doc

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金丝桃苷对正常小鼠免疫功能的影响① 黄凯②③ , 杨新波③,黄正明 ④,耿淼③,陈红艳③,王建华③,杨解人② (②皖南医学院 药理教研室 安徽 芜湖 241001;③解放军总医院老年医学研究所临床药理室 北京 100853 ;④解放军第302医院 药学部临床药理研究室 北京 100039) 摘 要:目的 研究金丝桃苷(Hyp)对正常小鼠免疫功能的影响。方法:采用碳廓清实验、溶血素实验及淋巴细胞增殖实验,观察Hyp对正常小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫的影响。结果:碳廓清试验,Hyp(12.5 mg·kg-1)可显著提高小鼠碳阔清指数K(P0.05), Hyp(25、12.5 mg·kg-1)可明显提高小鼠吞噬指数α(P0.05或P0.01),增强正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能;溶血素试验, Hyp(50、25、12.5 mg·kg-1)OD值均大于模型组(P0.05或P0.01),能明显促进鸡红细胞致敏小鼠溶血素的生成;淋巴细胞增殖实验,Hyp(0.5、0.25、0.125 mg·ml-1)对淋巴细胞增殖均有促进作用(P0.01)。结论 Hyp对正常小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能具有增强作用。  关键词:金丝桃苷;免疫调节;非特异性免疫;体液免疫;细胞免疫 金丝桃苷(Hyperin, Hyp),又名槲皮素-3-O-β-D吡喃半乳糖苷,是广泛存在于藤黄科、豆科、杜鹃花科和卫矛科等多种植物中的黄酮醇苷类化合物。1960年,Nair等[1]从Red–osier dogwood中分离得到Hyp之后,国内外学者开始对Hyp进行研究,发现Hyp具有平喘、止痛、降压、降血脂、抗衰老、保护心血管保肝降酶等作用[2-5],我们前期研究工作表明Hyp在体内外具有抗乙肝病毒的作用[6,7],而免疫功能的调节对治疗乙肝具有一定的促进作用。但目前,Hyp对免疫功能的作用尚未有系统的报道。为此,本实验拟观察Hyp对免疫功能的影响。 1 材料 1.1 动物 KM小鼠,♂,18~22g;豚鼠,300~320g,雄性,均由中国医学科 学院动物研究所繁育场提供。动物合格证号:SCXK-(军)-2004-001 ① 基金项目: 国家自然科学基金,NO②作者简介:黄凯(1982-),男,安徽广德人,硕士研究生。研究方向:临床药理学。Email:h ③通讯作者: 杨新波,教授,博士生导师。研究方向:中药药理。 Tel: (010E-mail:yang_xinbo@ 1.2 药物与试剂 金丝桃苷(Hyp)由解放军302医院药学部提供,纯度 95.0%, 分子式 C21H20O12,相对分子量464.3。印度墨汁,北京化学试剂公司产品;胎牛 血清、RPMI-1640完全培养基,美国GIBCO公司;ConA ,美国SIGMA公司;鸡血红细胞悬液,本室自行制备[8]. 1.3仪器 722分光光度计 (上海分析仪器总厂)  全自动酶标测试仪 (荷兰雷勃公司) 2.方法 2.1 Hyp对巨噬细胞吞噬功能的影响 KM小鼠,随机分为正常组、Hyp(50、25、12.5mg/kg)组,每组10只。ig给药,每天1次,连续14 d,正常组给予相应体积的生理盐水。d14每鼠尾静脉注入50%印度墨汁(0.1ml/10g),2min(T1)和10min(T2)后分别从眼眶后取血20μl,加到4ml 0.1%NaHCO3 溶液中,以正常小鼠血加入NaHCO3作空白对照,用722分光光度计在600nm波长处测OD值。 按公式计算碳廓清指数 K和吞噬指数α。 K=(LogOD1-LogOD2)/(T2-T1)  α= 3√K*体重/(肝+脾重) 2.2 Hyp对血清溶血素的影响 KM小鼠,随机分为正常组、模型组、Hyp(50、25、12.5mg/kg)组,10只/组。ig给药,每天1次,连续14天,正常组与模型组给予相应体积的生理盐水。给药d8除正常组外,每只小鼠均腹腔注射1:5(v/v)稀释的鸡红细胞悬液0.2ml致敏。末次给药后1h,眼眶取血。把收集的血清作100倍稀释后,取稀释的血清1ml与5%鸡血红细胞悬液0.5ml,10%豚鼠血清0.5ml混合,置于 37℃恒温水浴保温30min,然后移至冰浴终止反应, 离心2000r/min,5min,取上清,用722分光光度计在540nm处测OD值。 2.3 Hyp对淋巴细胞转化的影响 脾细胞悬液制备:将正常小鼠脱臼处死,置75%的酒精浸泡5min,在无菌条件下取出脾脏,去除被膜,置于盛有适量无菌Hank

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