微透析联用RP-HPLC对大鼠皮肤葛根素的药代动力学研究.doc

微透析联用RP-HPLC对大鼠皮肤葛根素的药代动力学研究 王丹 石力夫* 胡晋红 张立超 郑红 吕焕焕 （第二军医大学长海医院药学部，上海200433） 摘 要 采用在体微透析取样技术联用RP-HPLC的方法对大鼠皮肤中的葛根素进行了体内药代动力学的考察。将微透析探针进行体内外校正后，植入大鼠皮下,以磷酸盐缓冲溶液作为灌流液，收集的样品在以Hypersil-C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)为色谱柱，流动相为甲醇:水（含0.1 %醋酸）(30:70)，流速1 mL/min，检测波长221 nm的HPLC色谱条件下进行分析，所得的大鼠皮下游离葛根素浓度用kinetica软件进行处理。结果显示，微透析探针体内外校正结果显示葛根素适宜应用微透析技术，所建立的HPLC条件下葛根素在0.1~100 mg/L范围内线性关系良好(r=0.999 9)( n=6),浓度为100 mg/L、10 mg/L、0.1 mg/LRSD分别为0.38 ％、0.80 ％、1.21 ％ (n=6)0.44 ％、0.73 ％、1.68 ％ (n=6)kinetica软件拟合后，得到大鼠皮下非结合葛根素药-时曲线和主要药动学参数。所建立的微透析联用RP-HPLC方法能够在体、实时监测大鼠皮下葛根素浓度，方法快速、准确、简便，为葛根素经皮给药体内药代动力学研究提供了理论基础。 关键词 葛根素，微透析，药代动力学，高效液相色谱法 1 引 言 葛根是豆科植物野葛(Puerraria lobata) 的干燥根，为常用中药，具有升阳、活血、通络的作用。葛根素（Puerarine 8-β-D-葡萄吡喃糖-4，7,降低肺动脉高压、治疗糖尿病性周围神经病变以及改善胰岛素抵抗等作用,近年来已经成为国内研究热点[1-4]。 葛根素在水中的溶解度较低，其口服吸收差，生物利用度低。注射给药消除快，半衰期短，毒副反应大。透皮给药方式能够避免传统剂型的胃肠道刺激及肝脏首关效应，具有在病变部位维持稳定持久的血药浓度等优点。但是目前评价葛根素经皮给药系统最常用的方法是将实验动物处死,剥离其皮肤,采用Franz扩散池测定药物的透皮速率，以此来预测药物的生物等效性及药代动力学方面的研究[5-7]。但透皮吸收机制和药物释放研究发现Franz扩散池存在不足，如不能满足溶液流体动力学、离体皮肤的物理化学结构和生理条件发生差异等。 微透析技术(microdialysis ,简称MD) 是近年来发展起来的一种新型生物采样技术，可在基本不干扰生物体内正常生命过程的情况下进行在体(in vivo) 、实时(real time) 和在线(on line) 的取样和检测[8-11]，经皮微透析能在微创的前提下解决定性、定量、定位、微分析、连续取样、动态分析的研究要求，为经皮给药的药效和药代动力学研究以及新药的质量测定控制方面提供可靠和全新的手段。国外利用微透析技术联用RP-HPL测定法药代动力学 * E-mail：shilifu72227@ 　 2 实验部分 2.1 仪器和试剂 2.1.1 仪器 岛津LC-10AD高效液相色谱仪（日本岛津，SPD-10AVP可变波长紫外检测器）；DF-101集热式恒温加热磁力搅拌器（郑州巩义市予华仪器有限责任公司）；pH计（MP220型，瑞士Metter公司）；AG285型电子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；Valia-Chien 水平扩散池（自制）；微透析体外回收率校正实验反应瓶（上海盛惠工贸有限公司）；美国BAS公司生产的微透析设备，包括：灌注器推进泵(Baby Bee Syringe Drive，MD1001)四联流量控制器(Controller 240V/50Hz, MD-1020-K)(1 mL Bee Stinger Gastight Syringer，MD0100)(3-Syringe Bracket for Baby Bee，MD1002)(Work Bee Controller，MD1000,MD-1020)ZL200520041839.6），线性探针(自制，专利号：ZL200520046607.X，膜长30 mm)。 2.1.2 试剂 葛根素标准品（中国药品生物制品检定所，批号：110752-200511）；葛根素原料药（陕西汉江药业公司，纯度99 %，批号：0307001）；乌拉坦（化学纯，国药集团化学试剂有限公司）；Veet脱毛膏（法国Veet公司）；卡波姆980（美国诺公司PBS，pH7.4 Na2HPO4 3191 mg/L， NaH2PO4 775 g/L， NaCl 558g/L；甲醇（色谱纯，Sigma-Aldrich公司）；水为三蒸水（本院制剂室生产）；其他试剂均为分