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银杏雌雄株性别鉴别的研究进展 程勤贤 2004.12.21 2.?????? 生理生化研究 许多的研究表明,雌雄的代谢差异集中表现在氧化还原能力方面。一般说来,雌性器官或个体处于较还原状态,而雄性的处于相对氧化状态。赵云云等对银杏雌雄株氨基酸组分及含量进行了研究,发现银杏雌雄株的氨基酸平均含量有差异,雄株高于雌株,其中胱氨酸和酪氨酸含量较为突出。对银杏雌雄株的代谢差异检测发现雌雄株叶绿素和维生素Ｃ的含量有差异。以高效液相色谱(ＨＰＬＣ)法分析银杏树种中酸性醇溶性酚类物质的结果表明,不同性别的植株之间存在明显的性别相关峰,这些树种叶片水溶性酚类物质总量的测定结果是雌株普遍高于雄株,经检验这种差异达到极显著水平。 3.?????? 染色体核型研究 染色体形态特征是进行银杏雌雄性别鉴定的重要方法之一,也是最直接的遗传学证据。国内外有关银杏染色体组成及性染色体的研究已有报道。Tanaka等描述了叶片的染色体组成,并发现第1对大染色体的短臂上及第8对染色体的长臂上有随体,但没有报道性染色体存在的证据。Newcomer通过观察发现大染色体存在二型性,在大约一半的小孢子中表现为中部着丝粒染色体,而在另一半小孢子中出现次中部着丝粒染色体,推测这种二型染色体与银杏的性别决定有关。C.L.Lee(李正理)及Pollock的研究结果表明,银杏雌雄株的染色体具有形态上的不同,雌株4条染色体上有随体,而雄株只有3条染色体上有随体。在雄株中的1对最短的次端部着丝粒染色体中,只有其中的1条染色体上出现随体,因此认为这1对染色体即为性染色体,并提出银杏的性别决定机制属ＸＹ型,雌株为ＸＸ型,雄株为ＸＹ型。这与陈瑞阳认为银杏的性别决定机制属ＷＺ型,雄株为ＺＺ型,雌株为ＷＺ型的结论不尽一致。 4. 同工酶谱研究 钟诲文等经过4ａ对2株已知雌雄性别的银杏采用不同提取液提取、不同电泳方法和不同的显色方法进行鉴定,所得的过氧化物酶图谱基本相同,雌雄株间存在有规律性的差异,即雌株幼叶较雄株有较多的过氧化物酶区带,并利用这一区带对12株已知性别的银杏植株进行了过氧化物同工酶的普查,显示出与定点观察同样的结果,在对9株未知性别的银杏植株进行鉴定中,取得了与雌雄株一致的2种类型的过氧化物同工酶的图谱,从而说明了银杏苗木之间过氧化物同工酶的差异,可能成为银杏性别鉴定的生理生化指标。 5.?????? 分子生物学研究 80年代发展起来的分子标记技术是一组可以检测出大量ＤＮＡ位点差异性的分子生物学技术,它是在遗传信息的载体———ＤＮＡ水平上研究不同生物个体间的差异,不受环境条件、发育阶段、不同器官和组织的影响,而且基因组ＤＮＡ的变异非常丰富,分子标记的数目几乎是无限的。 6. 展望 银杏雌雄株之间的差异归根结底是ＤＮＡ分子之间的差异,利用分子标记在ＤＮＡ分子水平上去研究雌雄株之间的差异性,从中找到鉴别雌雄株的特异性ＤＮＡ片段,对此进行测序,进而制备ＤＮＡ探针或试剂盒,使得人们在幼苗期就能够对银杏雌雄株的性别进行鉴定。随着分子生物学技术的日益发展,分子生物学鉴定已成为一种可靠的鉴别途径,也可能是最终解决银杏雌雄株鉴定的最好方法。 * * 银杏雌雄异株,实生苗定植后一般需要20～30年才能开花结果,分出雌雄。由于银杏种子在成熟时具有一种特殊的臭味,因此,城市绿化需要雄株,而以生产白果为目的的银杏栽培主要需要雌株。因此银杏实生幼苗的性别早期鉴定,不仅具有理论意义,同时也具有实用价值。国内外学者曾在其形态学、生理生化指标、同工酶谱、染色体核型和分子标记鉴定等方面进行了研究, 为进一步研究、开发和利用银杏这一珍贵资源提供依据和参考。 ???? 1. 形态学鉴定研究 外观形态 雄株 雌株 种籽 种籽具尖头三棱 种籽近圆形二棱 苗期 侧枝与主干间夹角内有一些较大的叶片 侧枝与主干间夹角内无叶片 树冠 同龄树植株高大,形成树冠时间早,枝多而乱,呈广卵圆形 同龄树植株矮小 叶片 叶片大,锯齿缺刻深 叶小,叶端多为浅裂 花 雄花花序为柔荑状花序,外形似桑椹 雌花长在花梗顶端,分作两叉,外形如火柴梗 花芽 雄花花芽大而饱满,顶部稍平 雌花花芽瘦而稍尖 树枝 成龄树,雄株主枝与主干夹角较小,多在30度左右较挺直,生长势强,短枝较短,一般仅１～２厘米 雌株主枝与主干的夹角大,可达50度,向四周扩展,生长势弱,短果枝因连年结果,枝条延伸较长,可达10厘米 物候期 雄株比雌株发芽早、落叶迟 王双明等分别对两种不同树龄的雌雄银杏植株叶片进行了多项生理生化的比较分析,结果表明（表1，2 ）:雄株叶片的叶绿素、可溶性糖、蛋白质含量及CAT、POD活性均大于雌株叶片。这表明