遗传工程(genetic.pptVIP

遺傳工程（genetic engineering） 大綱 遺傳工程技術 限制酶 載體 選殖基因的確認 基因庫的製作 遺傳工程技術的應用範圍 遺傳工程技術（DNA重組技術）所需材料 限制酶restriction enzyme 原核生物所產生 保護原核生物免於外來DNA感染 1970 Johns Hopkins Hamiton Smith所分離 辨識DNA上特定的核苷酸序列 雙股DNA 4-8個核苷酸 雙股序列相同，方向相反， 稱迴文序列palindromic sequence 命名法：Hind III （Haemophilus infuenzae） 第一個字母細菌的屬名genus 第二、三字母細菌的種名species 第四個字母細菌的strain 羅馬數字為發現的順序 限制酶因切割位置不一樣有三種缺口 切出5’端突出的黏端5’-cohesive (sticky end) 切出3’端突出的黏端3’-cohesive (Sac I) 切出鈍端blunt-end 質體(Plasmid) 復製原ori：才能在細菌中大量複製 耐抗生素基因：以利選殖出帶有此質體的細菌株 選殖位置(mutiple cloning sites)供選殖基因接入的位置。 相同複製原的質體屬世同個不親和群體(incompatibility group) 當細菌中 已經先有了某種質體，種製原和它相同的質體就不能再進入 複製 原來源不同的質體，可以同時存在同一個細菌中 勝任細胞competent cells 進行基因選殖時，不可能 利用自然發生的接合現象來完成細菌轉型的步驟 改變細菌的細胞壁，增加細胞膜的通透性，讓質體很容易進入，這種細胞稱為勝任細胞(competent cell) CaCl2化學處理 便宜簡單的常用方法，並不因為方法老舊而被淘汰 電穿孔(electroporation) 方式 瞬間電流打洞提高細菌吃入DNA能力 細菌品系的選擇 製作勝任細胞必須要選用正處生長 旺盛期的健康細菌 現在大量被用來作實驗的細菌大部分是大腸桿菌，僅品系不一樣strain 防止細菌發生基因重組或突變 DNA重組成功的篩選方法-菌落藍白篩選 確認載體成功進入細菌 使用抗生素標記 確認基因有接入載體 lacZ基因被插壞 確定DNA重組成功的方法 LacZ基因可產生半乳糖苷酶，分解X-gal生成藍色菌落 LacZ基因被外來DNA插壞，不產生半乳糖苷酶，無法分解X-gal，菌落呈白色 進行植物基因轉殖常用的方法 植物細菌載體法 農桿菌(Agrobacterium, G-) 中的根瘤農桿菌(感染雙子葉植物) 植物在莖部或傷口會產生冠癭腫瘤 Ti質體(tumor-in ducing plasmid)之 T DNA可嵌物植物基因體中 冠癭鹼合成酶誘發冠癭腫瘤產生 植物基因轉殖流程圖 轉基因作物培養方式 基因轉殖植物的應用 主要轉殖於經濟作物：大豆、玉米、棉花、油菜、蕃茄、煙草、馬鈴薯、水稻…… 抗蟲基因-蘇力菌(Bacillus thyringiensis) 殺蟲結晶蛋白質基因(Bt基因) 蘇力菌孢子被昆蟲食用，於腸道中釋放出殺蟲結晶蛋白質，轉化成毒素破壞使腸細胞，蟲子因無法進食而死亡 抗病基因: 抗病毒：弱病毒(外殼蛋白coat protein, CP) 細菌：活化溶菌酶基因 真菌：增加幾丁質和葡聚糖水解酶表現 轉Bt基因作物 轉基因木瓜一 轉基因木瓜二 抗逆境基因 抗旱: 調節滲透壓蛋白質 高鹽: 調節滲透壓蛋白質 溫度: 抗凍基因(降低冰點、減緩冰晶生成速度) 提高農作物產量與質量基因 C4導入C3 提高光合作用效率 質量: 降低膽固醇、防止動脈硬化 不飽合脂肪酸-鏈長度 黃金米 轉殖胡蘿蔔素基因到稻米中 高鐵質米 甜甜米-澱粉與蛋白質含量較高 黃金米 生長更快速的基因 阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana) 基因體小，模式植物 促進細胞分裂之基因 轉殖於煙草中 抗殺草劑基因 雜草 VS 農作物 抑制植物代謝 轉殖細菌的抗殺草劑基因 基因轉殖植物可能衍生的問題 品種單純化 威脅其他農作物生長 影響遺傳的多樣性 改變植物生態 抗藥基因的轉移 基因轉殖動物的運用 基礎醫學研究：模式動物 提高動物產值：提高肉質、減少脂肪 增進動物健康：提升動物的免疫力 提供人類器官移植來源：轉基因豬、羊 改變乳汁成分：乳鐵蛋白、溶菌酶、減少乳糖含量 基因工程藥物：透過乳線分泌 動物分子農場 基因轉殖動物的管理 動物複製技術 Clone 複製是指無性生殖 不同於有性生殖 無基因重組 基因型完全相同 表現型（不）完全相同 複製動物的種類 複製羊（桃莉Dolly, 1996年） 複製牛、豬、老鼠、狗 複製寵物 複製羊流