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维生素B12注射液含量的测定 一、目的要求 1.掌握紫外-可见分光光度计的使用方法。 2.熟悉吸光系数法定量分析方法的应用。 三、仪器 与试剂 1.紫外-可见分光光度计(1200或其它型号) 2.恒温水浴锅 3.容量瓶（100mL) 4.移液管（5mL） 5.小烧杯、洗耳球等 6. 0.5mg/mL的维生素B12注射液标准品 7. 0.5mg/mL的维生素B12注射液样品 四、试剂 1、 0.5mg/mL的维生素B12注射液标准品 2、 0.5mg/mL的维生素B12注射液样品 五、操作方法 1.维生素B12样品液的配制 用吸量管精密吸取浓度为0.5mg/mL的维生素B12注射液5.00mL，置于100mL量瓶中，加纯化水稀释至刻线，充分摇匀。其浓度C样=25μg/mL=0.0025g/100mL.。 2.装液 将空白液（纯化水）与样品液分别盛于1cm厚的石英比色皿中，并分别正确放入1200型仪器试样室的参比槽和样品槽中。 3. 测定 按1200型紫外-可见分光光度计“自动”打印的操作顺序操作，波长361nm，打印出样品液的吸光度值A样。 4. 计算 根据比尔定律，计算出样品液的比吸光系数为： 样品液中维生素B12的含量百分比： 六、注意事项 1.维生素B12注射液有不同的规格，稀释倍数根据实际含量来定。 2.1200型紫外-可见分光光度计操作简单，应正确使用并注意维护。 3.若无标准品可采用文献的吸收系数，但不一定可靠，因测定条件不同。 七、思考题 1.《中国药典》规定维生素B12注射液的正常含量应标示量的90.0%～110%，根据本实验结果，判断是否符合要求？ 2.维生素B12在361nm和550nm波长处有最大吸收；《中国药典》规定在361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度的比值应为3.15～3.45.如果要对维生素B12注射液进行定性鉴别，如何操作？ 3.本实验是否可用玻璃比色皿？在紫外分光光度计上，还有其它方法能测其含量吗？ 八、讨论学习 1.探索在实验中，哪些因素容易造成误差？如何能提高实验的准确度？ 2.比较标准曲线法和吸收系数法的测定结果，并探讨其原因？ * * 分析化学教研室