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蛋白质定量测定 考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一.实验目的 掌握用考马斯亮蓝染料结合比色法测定蛋白质含量的原理和操作方法 二.实验原理 考马斯亮蓝G-250是一种染料，在游离状态下呈红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合后呈深蓝色，最大吸收峰在595nm。蛋白质含量在 1~1000ug范围内，蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法测定。   蛋白质-染料复合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1ug蛋白质。染料与蛋白质结合迅速，大约2分钟，结合物的颜色在1小时内稳定。所以本法操作简便，快速，灵敏度高，稳定性好，是一种测定蛋白质的常用方法。 三.实验材料 1.实验器材 721型分光光度计；试管；移液管；容量瓶。 2.实验试剂 1）.标准蛋白溶液:称取10mg牛血清蛋白，溶于蒸馏水中并容至100ml，制成100ug/ml的溶液。 2).考马斯亮蓝G-250试剂:称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml95%乙醇中，加入85%的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到1000ml。 此溶液可在常温下放置一个月。 3.样品溶液：配置约50ug/ml牛血清蛋白溶液作为样品。 四.实验方法 1.绘制标准曲线 取6支干燥洁净的大试管，编号，按下表加入试剂。 上述试剂加完后，混匀，室温净置２ｍｉｎ，在５９５ｎｍ处比色，读取各管吸光值，血清蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线： 2.样品测定 准确吸取1.0ml样品溶液于一支干燥洁净的试管中，加入考马斯亮蓝G-250试剂５ｍｌ，摇匀，室温净置２min，以标准曲线１号管为对照，在５９５ｎｍ处比色，记录吸光值． 五.实验结果  根据样品的吸光值从标准曲线上查样品的蛋白质含量． 谢 谢！ * * 1.0 0.0 5.0 １００ 0.8 0.2 5.0 ８０ 0.6 0.4 5.0 ６０ 0.4 0.6 5.0 ４０ 0.2 0.8 5.0 ２０ 0.0 1.0 5.0 0 标准溶（ml） 蒸馏水（ml） 考马斯亮蓝G-250试剂（ml） 蛋白质含量（ｕｇ） 6 5 4 3 2 1 管号  吸光度 血清蛋白含量