81-尿中δ-氨基乙酰丙酸的测定（WST23-1996）.pptVIP

尿中δ-氨基乙酰丙酸的测定（WS/T23-1996） 职业卫生与职业医学 乙酸乙酯萃——取对二甲氨基苯甲醛比色法 δ-氨基乙酰丙酸 δ-氨基γ酮戊酸 δ-ALA 提出问题 1 为什么铅吸收和铅中毒患者尿中ALA升高？ 2 ALA正常值是多少？诊断值是多少？ 3 如何对实验器皿除铅？ 【目的意义】 1 ALA检测是诊断铅中毒的指标 2 是驱铅疗效观察指标 3 是铅接触人员健康监护指标 【原理】 ALA+乙酰乙酸乙酯 吡咯化合物 乙酸乙酯 萃取 萃取液 + 显色剂 红色化合物 比色定量 【仪器】 【试剂】 1．冰乙酸；高氯酸；无水乙酸钠； 对-二甲氨基苯甲醛；乙酸乙酯； 乙酰乙酸乙酯；缓冲液（PH=4.6） 2．δ-ALA标准溶液：配制方法见书 【采样、运输和保存】 用聚乙烯塑料瓶收集尿样50ml 尽快带回实验室，测比重 4℃冰箱保存，2周内分析完毕。 【分析步骤】 1．标准曲线绘制 【分析步骤】 2．样品检测 从样品管的吸光度值减去空白管吸光度值，由标准曲线上查得出样品中δ-ALA含量。 【计算】 X（μmol/L） =（m/v）k×7.626 X：尿中δ-ALA校正浓度，ug/ml； m：由标准曲线查出的δ-ALA的含量ug； v：分析时所取尿样的体积，ml； k：尿样换算成标准比重下浓度校正系数 7.626为单位换算系数。 【组织安排】 每个实验台做一套标准系列（6个管） 每个人做一份自己尿样（样品和空白2个管） 【注意事项】 1配好合适的瓶塞，保证萃取时液体不损失 2记好标记，防止沸水浴时标记脱落 3水浴时注意开盖放气 4离心前要配平 5萃取要充分，取上层萃取液手法是关键 6测量时要重复3次 7爱护仪器，不可以把反应皿放在检测仪上 【参考资料】 1 金泰廙主编，职业卫生与职业医学[M]， 第五版，人民卫生出版社，2003，591-592 2 何凤生主编，中华职业医学[M]，人民卫生出版社，1999，223-224 * 尿中δ-氨基乙酰丙酸的测定 琥珀酰CoA 甘氨酸 ALAS ALA ALAD 卟胆原 尿卟啉原Ⅲ 粪卟啉原Ⅲ 原卟啉Ⅸ 血红素 血红蛋白 + 尿卟啉原合成酶 原卟啉原脱羧酶 粪卟啉原氧化酶 血红素合成酶 珠蛋白 Pb Pb 胞质内 线粒体 粪卟啉(血尿) FEP 低色素正细胞型贫血 ALA(血、尿) Fe2+ ZPP 554nm PH=4.6 100℃ 比重计 水浴箱 100ml聚乙烯塑料瓶 天秤 5ml具塞比色管 离心机 10ml离心管 分光光度计 δ-ALA标准管的配制 标准应用液，ml 0 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0 水，ml 2.0 1.9 1.7 1.5 1.3 1.0 δ-ALA含量,ug 0 1.0 3.0 5.0 7.0 10.0 管 号 0 1 2 3 4 5 以吸光度为纵坐标，ALA含量为横坐标，绘制标准曲线 冷却+4ml乙酸乙酯振摇100次 空 样 +1ml尿+1ml水+2ml缓冲液 +0.4ml缓冲液 +0.4ml乙酰乙酸乙酯 沸水浴 12min 离心 取上层2ml于具塞比色管中 +显色剂2ml静止10min 554nm 比色，乙酸乙酯作参比 三值建议值（μmol/L） 指标 正常值 可接受上限值 诊断值 PbB 0.97 1.9 2.9 PbU 0.12 0.34 0.58 ZPP 1.34 1.79 2.91 EP 1.34 2.23 3.56 ALA 22.9 30.5 61.0 【评价】 * * *