684-实验三 常用培养基的制备、灭菌与消毒.pptVIP

实验三 常用培养基的制备、灭菌与消毒 实验目的：1.了解培养基的配制原理 2.掌握配制培养基的一般方法和步骤 培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质 原则：目的明确 ;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济节约 方法：查阅文献;精心设计;试验比较 步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.0～7.2(后调) 高氏1号培养基 高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下： 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～20g，水1000mL，pH7.4～7.6。 查氏合成培养基 查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基,其配方如下： NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然 麦芽汁培养基 用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在50-60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤，调pH为6.0。 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表2 观察菌落形态并记录 序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢 种类 * * 培养基种类: 碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水 一、按成份的不同划分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 二、按培养基的物理状态划分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 三、按培养基用途划分 基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基 消毒与灭菌 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。 方法： 物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。 加热法： 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在180°； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70°时才开箱门。 湿热法 ： 原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 常压蒸汽灭菌： 对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌 135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。 优点 ：保持食品价值和营养成分。 过滤除菌： 原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。 注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。 辐射灭菌： 原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间