422-实验一 培养基母液的配制.pptVIP

* 实验一 培养基母液的配制 一、实验目的 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 二、实验用具 电子天平（感量为0.0001g）、烧杯、量筒（1000mL、100mL、50mL）、容量瓶（100mL、500mL）、细口瓶。药勺、小玻璃棒。 三、实验药品 按照培养基配方准备（以MS配方为例）。 四、培养基母液的配制 （一）大量元素母液的配制（500mL） 按照培养基配方的用量把各种化合物扩大10倍称量，分别在烧杯中用重蒸馏水溶解。可以加热使其溶解（注意温度不可过高，60-70℃）。溶解后定溶于500mL重蒸水中。在混合定溶时必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。 4400 440 CaCl2·2H2O 1700 170 KH2PO4 3700 370 MgSO4·7H2O 16500 1650 NH4NO3 定溶于1000mL蒸馏水中，最后加入CaCl2·2H2O。每升培养基取此液100mL。 19000 1900 KNO3 备 注 扩大10倍 称量 培养基 配方用量 化合物名称 表 MS培养基大量元素的称量及定溶 mg/L 四、培养基母液的配制 （二）微量元素母液的配制（100mL） 按照培养基配方的用量把各种化合物扩大100倍称量，分别在50mL烧杯中用重蒸馏水溶解。溶解时，在每只烧杯中加入重蒸馏水几毫升（切勿加多）。可以缓缓加热使其溶解。待全部溶解后，混合定溶于100mL容量瓶中，贴好标签保存于冰箱中。 2.5 0.025 CoCl2·6H2O 83 0.83 KI 25 0.25 Na2MoO4·2H2O 620 6.2 H3BO3 2.5 0.025 CuSO4·5H2O 860 8.6 ZnSO4·7H2O 用100mL容量瓶定溶于100mL蒸馏水中。每升培养基取此液1mL。 2230 22.3 MnSO4·4H2O 备 注 扩大100倍 称量 培养基 配方用量 化合物名称 表 MS培养基微量元素母液配制 mg/L 四、培养基母液的配制 （三）铁盐母液的配制（100mL） 目前常用的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。 方法是：称取5.57g硫酸亚铁和7.45g乙二胺四乙酸二钠，分别用蒸馏水溶解。定溶于1000mL蒸馏水中，常温保存。在配制培养基时，每配制1000mL取此液5mL。 四、培养基母液的配制 （四）激素及其他有机物母液的配制 激素类、维生素类及用量较小的有机物类，为了使用方便和准确，也应配成母液。母液的浓度根据培养基配方灵活确定。经常使用的母液浓度为0.2-2mg/mL，但也有例外。如肌醇用量较大，可配成10-20mg/mL的母液浓度。 必须注意，溶解各种有机化合物所用的溶剂不同。 一般常用的维生素都是水溶性的，故用蒸馏水溶解。生长素类等是醇溶性的，配制时，先用少量95%的酒精溶解，然后用重蒸馏水定溶。细胞分裂素类先用少量1mol/L盐酸或氢氧化钠溶解，然后再用重蒸馏水定溶。定溶后的母液保存于5-8℃冰箱中备用。 *