320-培养基母液的制备.pptVIP

培养基母液的制备 一 、实验目的 母液（stock solution）即以所设计的培养基中的化学成分进行单独或按几种相似成分配制成扩大一定倍数呈物理性质状态变化的溶液。制备母液的目的不仅减少配制培养基时反复称量的重复工作量问题，而且更重要的是保证了试验的重复性和试验的精确性。通过实验，了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类，掌握培养基母液配制方法。  二 、实验原理 培养基的种类及其成分直接影响到培养物的生长，故应根据培养植物的种类选择适宜的培养基。不论什么种类的培养基，其中的基本成分都包括大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、植物激素等几类物质，制备时可根据个人习惯上的差异，一般按大量元素10×或20×、微量元素500×或1000×、铁盐200×等不同母液种类分别混合配制（无机盐类母液中的化合物成分按一定顺序单独溶解后混合），有机物质中的氨基酸、维生素和激素分别以1mg/1ml（或0.5mg/1ml）单个配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。在配制培养基时，又按培养基的基本配方及其培养基设计要求的具体成分含量的多少进行量取各种母液即可。 三 、实验器具 电热干燥箱、冰箱、天平、水纯化装置、电热搅拌器、微波炉、试剂瓶、烧杯、玻棒、容量瓶、量筒。 四 、实验方法 为简化一种培养基的配制工作，一般分别将用量大的、用量甚微的无机盐类分别归类配制成混合母液，其他有机物类是按照单个母液进行配制的；但在研究不同培养基的配制时，往往是无论什么种类的培养基，其中所含的化学成分大体上是相似的，若每个成分均按单个配制成母液，则完全可以方便地实现多种培养基配制的研究工作。现以MS基本培养基（Murashige和Skoog,1962）为实例，介绍混合母液与单个母液的配制方法。 1、大量元素母液的配法 大量元素的用量大，混合母液按培养基配方的需要量，配制倍数不宜过大，一般10倍即可；单个母液则可按20倍配制。方法按表 2-1 MS配方中大量元素序号，将各种化合物的称量分别扩大后用天平称取，并分别用适量蒸馏水溶解于250ml烧杯中（如溶解速度慢，可稍加热），再定容至所配制的母液体积；混合母液则依次混合已熔化合物溶液并搅拌，以免产生沉淀，最后定容至所配制的母液体积。最后倒入试剂瓶中并贴好标签。  2、微量元素母液的配法 微量元素用量甚微，为了提高精确度，混合母液一般扩大为1000倍，因倍数大，故制备体积500ml即可，单个母液可根据实际按照每ml含有某一个便于计算的含量来配制成母液。按表2-2 MS配方中微量元素配方需要量，将各种化合物分别扩大后，用电子天平称取，并分别用 100ml 烧杯加适量蒸馏水溶解，单个母液按所配制的母液体积定容，混合母液则依次将上述溶液混合于所配制母液体积的容量瓶中定容（其中有的称取量不足以保证精度时，仔细想一想如何达到精度的要求），最后倒入试剂瓶中并贴好标签。 3、铁盐母液配法 多数培养基中都有铁盐存在且含量也相同，因为其二价铁离子易被氧化，故与乙二胺四乙酸二钠螯合，配制时先将螯合剂加热溶解后，再迅速称取铁化合物倒入溶解，冷却后定容。按表2-3 MS配方中铁盐所含两种化合物需要量，分别扩大200倍，定容至250ml，倒入棕色试剂瓶中（因铁盐不稳定，易分解），贴上标签。 4、有机物类母液的配法 有机物一般用量甚微且易变质，需单独配制且母液量至多配制25或50ml已足够使用。配制的母液种类有甘氨酸，维生素B1、B6、VPP、肌醇，一般配制母液浓度为1mg/ml，其中因肌醇（维生素增效剂）用量相对较大，母液的浓度一般为20 mg/ml。如下表2-4配法。 5、植物激素类母液的配法 各种激素主要有细胞分裂素和生长素两大类，一般细胞分裂素（类似）KT、BAP、2-iP、ZT等先用少量1mol/L HCl或1mol/L NaOH配制，生长素类(类似物) 2.4-D、NAA、IAA、IBA等先用少量95%乙醇溶解后，配制成1mg/ml的浓度（为避免加蒸馏水后又重结晶析出的现象，定容时可将乙醇的含量达到40%左右）。 五、母液的存放 各种配制好的母液贴上标签，标明母液名称、倍数、日期，置于冰箱中（2-4℃）保存备用。母液的贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 六、作业