828-第七章 基因的定点诱变.pptVIP

第七章 基因的定点诱变 一、传统的诱变 利用能够修饰DNA分子的化学或物理诱变剂处理生物体 射线（紫外线、X射线、γ射线等） 化学诱变剂（亚硝酸、羟胺、EMS、亚硝基胍等） 不足： 生物体的任何基因都可能发生突变，目的基因突变率较低，筛选困难 即使获得期望表型的突变体，无法保证突变确实发生在目的基因上 在基因克隆和核酸测序技术发展之前，无法知道基因中突变的位置和性质 二、基因定点诱变 定点诱变（site-directed mutagenesis): 在体外特异性改变某个碱基的技术 研究基因的结构与功能的关系 获得所需功能的突变体蛋白质 1. 寡核苷酸盒式诱变 Cassette mutagenesis 利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段，即寡核苷酸盒，取代野生型基因中的相应序列 2. 寡核苷酸引物诱变 ①基本原理： 使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作为引物，启动单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为了新合成DNA子链的一个组成部分，因此所产生出来的新链便具有已发生突变的碱基序列 作为诱变剂的寡核苷酸序列： 人工合成一段8~18个碱基的寡核苷酸序列，该序列中除了所需的碱基突变外，其余的则与目的基因编码链的特定区段完全互补