用Medimachine系统制备实体组织的单细胞悬液.PDFVIP

3·52 · 临床与实验病理学杂志 　J Clin Exp Pathol 　1999 Aug ;15 (4) 用 Medimachine 系统制备实体组织的单细胞悬液 李 　宾 　周春喜 ( ) 　　流式细胞术 flow cytometry , FCM 作为一种 胞或单细胞核悬液的自动化系统。样品制备过程不 可在单细胞水平上对大量细胞进行快速、准确、多参 需加任何消化酶或去污剂等 , 它由 Medimachine 、 数定量分析和分选的高技术 ,在细胞生物学、免疫 Medicon 及 Filcon 3 部分组成。其中 Medimachine 学、肿瘤学等方面的应用日趋广泛和深入。进行 为主机 ,后两者为配件。Medicon 为一圆形聚乙烯 FCM 分析的前提是样品为单细胞悬液 ,而大多数实 元件 ,底部设有一个固定的不锈钢网筛 ,上有约 100 ( ) 体组织都难以制成高质量的单细胞悬液样本 , 因而 个正六边形筛孔 直径约为 1 mm ,每个筛孔周围 大大限制了 FCM 对实体组织特别是实体瘤的分析 有 6 个经特殊设计的微型刀片以进行精细的组织切 和研究 〔1〕。 割 ,主机则可以每分钟 100 转的转速带动 Medicon 实体组织单细胞样本制备一般采用手工方法 , 中轴的旋转片转动。Filcon 为一直径 15 cm 的细 主要有机械剪切法、酶消化法、去污剂化学处理法、 胞过滤器 ,可按不同孔径对组织细胞混悬液进行过 〔2 〕 针头抽吸法等 。但上述方法均存在组织用量多 , 滤。 制样过程繁琐耗时 ,细胞产率及实验重复性低等问 12 　使用方法 　先将新鲜的组织冲洗干净或将冻 ( ) 题。我室采用 Medimachine 系统 丹麦 Dako ,仅在 存的组织解冻 ,去除脂肪及坏死组织 ,取一小块组织 ( 3) 数分钟内即完成了新鲜和冻存实体组织单细胞悬液 约 10 mm ,与约 1 ml PBS 一起加入 Medicon ,将 的样本制备 ,样本完全适合 FCM 分析 ,结果满意。 Medicon 插入 Medimachine 中 , 把开关转向运行位 ( ) 置 ,运行 5 ～30 s 时间因样品而定 , 关机 , 取出 1 　Medimachine 系统 Medicon , 用注射器吸出混悬液 ,用相应孔径的 Fil 11 　结构和工作原理 　Medimachine 系统是采用 con 过滤 ,400 g 离心 5 min , 以 PBS 或细胞培养液悬 机械剪切的方法将剪成小块的实体组织制备成单细