DNA复制-复旦《医用分子遗传学》课件.ppt

第三章 DNA 复制 (Replication of DNA) DNA 复制一般特征 参与DNA复制的酶类 DNA复制基本过程 DNA复制的调控 DNA损伤与修复 第一节 DNA复制的一般特征 一、DNA的生物学功能 1、储存遗传信息 2、复制遗传信息 3、表达遗传信息 4、遗传变异 Watson(Nature,1953) :我们假设的特异的（碱基）配对方式提示了遗传物质可能的复制机制：每一条链均可作为合成一条新链的模板，就使子代双螺旋与母本完全一致。 第一节 DNA复制的一般特征 一、DNA的生物学功能 1、储存遗传信息 2、复制遗传信息 3、表达遗传信息 4、遗传变异 二、DNA复制方式 根据实验结果：第一代DNA仅有一条带否定了全保留复制的可能 DNA的半保留复制 Semiconservative Replication DNA双链解开，以单链做模板，碱基互补原则，各自合成一条链。在新合成的DNA双链分子中，一条是原来的老链，一条是新链。 2 DNA复制的半不连续性 一条链连续合成，称主导链，Leading Strand 另一条链分段合成，称随从链Lagging Strand 。 原因：DNA双螺旋分子两条链方向相反，新链合成的方向只能5’→3’一个方向合成。 3 DNA复制的双向性 在两个方向同时进行，形成两个复制叉(Replication Fork ). 概括： 半保留 半不连续性 双向性 第三节 参与DNA复制的酶类 参与DNA复制的酶或蛋白因子： 1 DNA聚合酶 催化DNA的合成 2 引物酶 起始RNA的合成 3 连接酶 连接冈崎片段 4 DNA解链，解旋酶 5 DNA结合蛋白 一 DNA聚合酶(Polymerase) 1956年，大肠杆菌DNA聚合酶 1959，Nobel Prize （一） 作用机制 以DNA做模板，碱基互补配对，催化4种dNTP之间形成磷酸二酯键，从而延长DNA链。 在模板链上进行 不能从头合成，在引物的3’OH端上延长 新链延长方向为5’→3’延长 （二）原核生物DNA聚合酶 有3种：DNA聚合酶 I，II，III。 多功能酶： 合成DNA的活性 聚合酶作用,延长DNA链。 水解DNA的活性 外切核酸酶活性,切除不配对碱基，起校读作用 1、DNA聚合酶 I 大肠杆菌DNA聚合酶I ： 单链多肽蛋白质,分子量为109KD. 性质：多功能酶 大亚基：5’→3’聚合酶活性 3’→5’外切酶活性 小亚基：5’→3’外切酶活性。 3’→5’外切活性示意图 DNA聚合酶I 在DNA复制中所起的作用 不是主要的复制酶 RNA引物的切除 DNA损伤的修复：紫外线作用形成的TT二 聚体的切除 链置换： 可能参与遗传重组 切口平移（nick translation） 探针标记 2 DNA聚合酶II 不是复制酶，主要在DNA修复中起作用，无5’→3’外切酶活性。 3 DNA聚合酶 III 1972年发现 催化效率高，主要复制酶。由10种亚基组成： ? ? ? ? ???‘??? （1）核心聚合酶： ? ：DNA聚合酶活性 ? ：3’-5’外切酶活性，控制 复制忠实性 ?：核心酶的组建 （2）? 二聚体： 构成滑动钳，将全酶固定在DNA模板上，提高合成速率（20/秒----750/秒。 （3）? 复合物 ：?2??‘?? 协助? 二聚体结合到DNA DNA聚合酶 III 形成不对称的二聚体，与DNA双链结合，后随链折叠1800，使后随链的物理方向与主导链一致，同时催化两条链的复制。 DNA 聚合酶 polⅠ polⅡ pol Ⅲ 亚基数目 1 ≥7 ≥10 5 ′→3 ′聚合酶活性 + + + 3 ′→5 ′外切酶活性 + + + 5 ′→3 ′外切酶活性 + - - 聚合速度(核苷酸/分