1.2基因工程基本操作程序II.pptVIP

预习学习内容 （一）1. 目的基因 基因表达载体 导入受体细胞 检测与鉴定 2. 从基因文库中提取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 人工合成目的基因 3.目的基因 启动子 终止子 标记基因 （二） 1. 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微 2. DNA分子杂交 分子杂交技术 抗原—抗体杂交 预习自我检测 1-4 A D C B 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库提取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、Ca+处理法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译、个体检测 谢谢合作！ * * 山东省青州市第二中学 顾峰 基因工程的基本操作程序Ⅱ 学习目标 1.写出基因工程的四个操作步骤 2.解释基因文库、基因组文库、部分基因文库的区别与联系 3.分析基因工程四个步骤的原理、工具及具体的操作程序 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 目的基因导入受体细胞 目的基因检测与鉴定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 1.转化: 合作探究1. 将目的基因导入受体细胞 2.常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等 3.将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 且侵染途径，且因受体细胞的不同而不同。 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 ①农杆菌转化法 方法—1.导入植物细胞 （见教材P12“生物技术资料卡”） ②基因枪法 ③花粉管通道法 显微 注射 分裂 分化 移 植 发 育 2.导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动 物 的 受 精 卵 含目的基因的受精卵 早 期 胚 胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因 动 物 问题 为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？ 显微注射技术 3.导入微生物细胞 繁殖快、单细胞、遗传物质少 大肠杆菌（E.coli） 1. 过程 Ca2+ 处理法 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 2.原核生物特点 3. 常用受体细胞 ☆思考回答1.为什么基因工程科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞？ ☆思考回答2. 为什么要用Ca2＋处理细胞？ 繁殖快、遗传物质相对较少、操作简单、价格低廉。 因为大肠杆菌等细菌的细胞壁成分主要是肽聚糖，因此一般要先用Ca2＋处理，以增加细菌细胞壁的通透性。 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— Ca+处理法 将目的基因导入受体细胞 合作探究2. 目的基因的检测与鉴定 目的基因是否真正插入受体细胞的DNA中，是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达，只有通过检测、鉴定才能得知。 常用的检测手段主要从分子水平和个体水平进行。 包括抗虫、抗病的_______实验，以确定是否有______________________的程度； 基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等 目的基因是否 翻译出蛋白质 目的基因是否 转录出mRNA 目的基因是否 进入受体细胞 分子 检测 结果显示 方法 检测内容 类型 个体水平定鉴 DNA分子杂交 显示出杂交带 分子杂交技术 显示出杂交带 抗原—抗体杂交 显示出杂交带 接种 抗性以及抗性 目的基因的检测与鉴定 —检查是否成功 适当限制 酶切割 用同位素标记的 目的基因片段杂交 1. 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 提取受体生 物全部DNA DNA片段 显 出 杂交带 （表明目的基因已插入） DNA分子杂交技术 用同位素标记的 目的基因片段杂交 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 提取受体生 物的mRNA 显 出 杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 特别提醒：检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 分子杂交技术 ☆思考回答3. β—珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的β—珠蛋白，想一想，应该如何设计？ 1.从鼠体内提取β—珠蛋白的基因