江南大学《发酵原理》7发酵科学与工程基本理论.pptVIP

2002年春节 张星元：代谢工程导论 2002年春节 张星元：代谢工程导论 代序 江南大学生物工程学院 微生物细胞机器的工作模式 * * 发酵科学与工程的基 本 理 论 发酵工程学科的基本理论首次在网上发表。这个理论包括发酵工程的新思路，微生物细胞生命活动的三条基本假说，以及调动微生物为工业生产服务的八个应用性推理。这些在科学研究和教学研究的基础上、在教学相长的过程中建立起来的理论正在经受实践的检验。请您耐心读一读，恳请批评指正 。  江南大学生物工程学院 张星元 2003年5月8日 biozhang@163.com 微生物细胞机器的工作模式工作模式微生物代谢的“五段式”工业发酵的“五字策略发酵工程的基本理论微生物生命的三个基本假说发酵工业生产的八个应用性推理 为了研究的方便，须对复杂而多样的工业发酵进行切合当前发酵生产实际情况的、合理的简化。 当今最有代表性的工业发酵： ①生产菌属于化能异养型微生物  ②目的产物是在细胞内合成后被排放到细胞外的代谢中间产物 ③最基本的代谢是碳元素化合物的代谢 经过抽象思维，为以上有代表性的工业发酵建立这样的 工 作 模 式 微生物细胞机器的工作模式 Working pattern of cell-machines in Industrial Fermentation 工作模式的说明：① 培养基中的有机营养物质跨膜进入微生物活细胞；② 微生物细胞的代谢促成工业发酵的目的产物在胞内生成；③ 工业发酵的目的产物跨过细胞膜被排放到细胞外。 在此工作模式的基础上，提出了工业发酵中微生物代谢的 五 段 式 微 生 物 代 谢 的 “五 段 式” 胞外降解及跨膜步骤 向心途径 中心（代谢）途径 离心途径 跨膜步骤和胞外修饰 在工业发酵生产中，培养器中的微生物细胞的代谢是分步进行的。胞外营养物质从环境（培养基）跨膜进入细胞后，一般要经过 “向心途径”、“中心途径”和 “离心途径” 等三段连续的代谢途径的代谢，才能在胞内生成目的产物，最后，目的产物经过膜排出细胞，回到环境（发酵醪液）。 因此，典型的理想载流途径应该由以上五段承担不同代谢分工的、依次衔接的代谢途径组成。这就派生出了 “ 载流途径的五段式 ” 。在这条载流途径上流动的代谢主流也有对应的五段，从而派生出“ 代谢主流的五段式 ”。 微生物代谢的 “ 五段式 ” 的基础上，提出了工业发酵菌种选育和工艺控制的 “五字策略” ：进 、 通 、节 、 堵 、出。 “五字策略”最初发表于1997年出版的《工业微生物生理与遗传育种学》一书的第231-232页 N P P 进 出 通 节 堵 用于菌种选育和工艺控制的“五字策略” ① 进，促进细胞对碳源等营养物质的吸收；② 通，使来自上游和各个注入分支的碳架物质能畅通地流向目的产物；③ 节，阻塞与目的产物的形成无关或关系不大的代谢支流， 使碳架物质相对集中地流向目的产物；④ 堵，消除或削弱目的产物进一步代谢的途径；⑤ 出，促进目的产物向胞外空间分泌 “五字策略”是建立在人一厢情愿基础上的统筹策略。尽管按 “ 五字策略 ” 制定育种方案时，是以代谢途径及其调节机制为依据的，目前还不可能把未知的代谢刚性因素全部考虑在内，在实施时也就不可能完全达到预期目标。因此， “ 五字策略” 仍需用代谢流量分析来补充、修正。 对载流途径上的主要节点（产物形成时代谢流量发生明显改变的节点）的性质要做到心中有数。对于刚性节点，仅仅改变下游反应的酶水平或活性，是不可能对代谢流进行顺利导向的，就不必徒劳；如果目标节点为挠性节点（flexible node ） 或弱刚性节点（ weakly rigid node）， 按“五字策略 ” 制定的方案就具有可行性，因为挠性节点对代谢流的导向是最顺从的。 “ 五字策略 ”与代谢工程的有关分析是互补的，各有侧重的。采用 “ 五字策略 ” 进行常规育种，实验成本低、周期短，一般（五个字中只要有两三个字有效 ）都能取得比较好的效果；而且，常规育种的成果菌种往往作为基因供体用于代谢工程育种。因此，从长计议，“ 五字策略 ” 宏观指导下的代谢工程更有潜力。 发酵工程的基本理论 运用归纳逻辑的思维方法提