医学论文：浅谈龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选.docVIP

浅谈??????????????? 作者：曹悦，左代英，王维宁，刘敬武，孙启时【摘要】? 目的建立龙胆最佳提取工艺，为龙胆的种植和质量研究奠定基础。方法采用l9(34)正交表安排实验,确定最佳提取条件。色谱柱为shimadzu c18(3.0 mm×75 mm, 1.7 μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸(vv= 5.5∶94.5)，流速0.80ml/min;检测波长235，270 nm;柱温为40。结果影响因素最大的是提取溶剂，其次是提取方法，最小的是提取时间。结论各因素较优的水平组合为a1b1c1，即甲醇超声提取30 min。 【关键词】? 龙胆; 正交实验设计法; 獐牙菜苦苷; 龙胆苦苷　　abstract：objectiveto establish best extraction process of gentiana scabra bge.by uplc so as to provide base for the plant and research of gentiana scabra bge. methodsby l9(34)orthogonal design , the optimal condition was confirmed as follows: shimadzu c18(3.0 mm×75 mm,1.7μm), acetonitrile-0.1% phosphorylation(v∶v = 5.5∶94.5) as nwbile phase the flow rate was 0.8 ml/min, detection wavelength was 235nm and 270nm and the columne temperature was 40℃. resultsthe extraction solution was the most effective factor ,the second was the method，and the last was the extraction time. conclusionthe best extraction process is a1b1c1 : super sonic extraction for 30 min in methanol. 　　key words： gentiana scabra bge. ; orthogonal design; swertiamarin ; gentiopicroside 　　龙胆为龙胆科植物条叶龙胆gentiana manshurica kitag.，龙胆gentiana scabra bge.，三花龙胆gentiana triflora pall.或坚龙胆gentiana rigescens franch.的干燥根及根茎1。具有清热燥湿、泻肝胆火的作用。我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等地。现代药理研究证明,龙胆苦苷具有显著的肝脏保护、抗炎、抗病原微生物、中枢兴奋及健胃利胆等作用,与中医对龙胆的应用基本上一致2。龙胆的主要有效成分为环烯醚萜类化合物，有龙胆苦苷(gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(swertiamarin)及獐牙菜苷(sweroside)等,这类物质也是其苦味的物质基础3，但这类成分极性较大，稳定性较差，所以对提取的条件要求较高。本实验探讨了溶剂类别、浓度、提取方法、提取时间对龙胆有效成分提取的影响，为龙胆化学成分研究及有效成分的合理利用奠定基础。　　1 仪器与试剂　　岛津-uplc超高效液相色谱仪，lc-solution色谱工作站。獐芽菜苦苷对照品(北京中西远大科技有限公司，批号070316 纯度99.06%)，龙胆苦苷对照品(中国生物制品检定所，批号110770-200510)，磷酸为分析纯，其余试剂均为色谱纯。　　2 方法与结果　　2.1 对照品溶液的制备分别精密称取獐牙菜苦苷和龙胆苦苷对照品适量,加甲醇制成0.15mg/ml和0.3mg/ml的溶液。　　2.2 色谱条件色谱柱为shimadzu c18 (3.0mm×75 mm, 1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(5.594.5)，流速0.8ml/min，检测波长分别为235 nm和270 nm，柱温40，进样量4 μl。　　2.3 实验因素与水平根据预实验结果,以提取溶剂、提取方法、提取时间3个因素，每个因数3个水平，采用l9(34)正交表安排实验。见表1。表1 实验因素与水平　　2.4 正交实验称取龙胆药材27份(药材来源于辽宁省龙胆药材gap生产基地) ,按表2安排实验。以龙胆苦苷、獐牙菜苦苷的含量加和为指标,采用直观分析法、方差分析,确定最佳工艺条件。综合评分结果=獐牙菜苦苷含量+龙胆苦苷含量。表2