中国红豆杉内生真菌产紫杉醇的定性分析论文正文.docVIP

引言 红豆杉(Taxus)又名紫杉，为裸子植物，属于冰川活动期的孑遗植物。它的生态环境独特，散生于常绿阔叶林或针阔混交林，分布虽广，但数量稀少，株群密度小，自身繁殖力弱，生长速度极慢。目前，全红豆杉属植物仅存11，我国有41变。东北红豆杉(Taxus . cuspidata. sieb.et .Zucc)、西藏红豆杉(Taxus ,wallichiana.Zucc)、云南红豆杉(Taxus. T unanensis. Chengef. L. K. Fu)、中国红豆杉(Taxus. chinensis. Rehd)、南方红豆杉(Taxus.chinensis. Var.Mairei)[1]。从红豆杉植物的树皮中提取分离出来的一结构复杂的二萜化合物紫杉醇紫杉醇（taxol）为白色结晶粉末微溶于水，易溶于氯仿丙酮等有机溶剂。1位、2，位和7位各有一个暴露的羟基,除1位的羟基由于在紫杉醇的三维立体结构中位置被屏蔽而呈现较不活泼的惰性外,其它位置的羟基都非常活泼,2，位易被酰化,7位易发生氧化和异构化,10位上的乙酰基容易失去而形成10,2去乙酰紫杉醇。紫杉醇13位上带有一长的脂侧链,在一定条件下能分解,脱除脂侧链,形成baccat in E,碱是紫杉醇脂侧链降解反应的催化剂[2]。也就是说,紫杉醇分子结构很容易发生变化。有实验表明[3]，紫杉醇降解产物包括Baccat in E、72表2紫杉醇、72表2、10、2去乙酰基2紫杉醇及另一种未知化合物,产物间存在网络关系。Kingst in 等[4-5]认为,在酸性条件下及pH4～8范围内,紫杉醇比较稳定,但在碱性条件下很快分解。 紫杉醇1971年Wani等[]从短叶红豆杉(Taxus breviifolia)的树皮中分离得到，Schiff等[]随后证实具有独特的抗癌机制，它作用于细胞微管（Microtuble）,通过与微管蛋白N端第31位氨基酸和第217～231位氨基酸结合,诱导和稳定微管蛋白聚合，抑制其解聚，增加聚合程度，使维管束不能与微管组织中心相互连接，将细胞周期阻断于G2/M期，导致有丝分裂异常或停止癌细胞增殖[,9]。1992年12月29日，美国食品药品管理局(FDA)批准Bristol-Myers-Squibb(BMS)公司将紫杉醇上市，商品名为Taxol，用于治疗卵巢癌和乳腺癌[]。此后，临床上发现紫杉醇一些新作用，其中包括与抗艾滋病药物合用可治疗卡波济氏肉瘤(一株艾滋病人特有的恶性肿瘤)，对结、直肠癌、癌和转移性乳腺癌等一系列的棘手肿瘤肺癌、头部和颈部肿瘤、恶性黑色素癌和肉瘤等均一定疗效[]。此外，临床上还观察到它对其他疾病有一定的应用潜力，例如，它具有抗类风湿性关节炎、抗疟的作用，对中风、早老性痴呆和先天性多囊肾病也有一定的疗效。紫杉醇由于其独特的抗癌机制，普通抗癌药物无能为力的某些晚期肿瘤均有良好疗效。但由于原料和生产技术的限制，全球紫杉醇的产量严重不足，因此价格昂贵。据所掌握的资料显示，我国市场上纯品紫杉醇的售价在每千克300-500万元人民币之间许多癌症病患者望而却步近10多年来，全世界的科学家和制药工业上生产紫杉醇主要是从红豆杉的树皮中提取，但红豆杉的生长缓慢，资源缺乏（全世界野生红豆杉仅有1000万左右），在红豆杉的不同部位紫杉醇的含量均很低只有树木干重的0.0001%0.008%，加之紫杉醇溶解性差，平均产量约015%生产杉醇需要红豆杉的树皮。一个疗程剂量的紫杉醇需要6棵高达lm、树龄100年以上的红豆杉树皮原料。据估测，紫杉醇正式运用于临床以后，每年约需200kg以上按现在的提取率0.03%计算，每年要收集700kg红豆杉树皮来提取，即使将全部的天然资源采伐，也只能满足短期需要[]。随着该药品应用范围的扩大，所需红豆杉数量将十分可观，这也给红豆杉资源带来严重威胁，直接从红豆杉树皮中提取紫杉醇，必然严重导致生态平衡，造成对森林和人类环境以及生物多样性不可弥补的损失化学法全合成紫杉醇，已于1994年在实验室里取得了成功，尽管这些方法是化学研究上的杰作，但紫杉醇手性基团较多，合成路线复杂，反应条件难以控制，试剂繁多，只能停在实验室阶段，不能进行工业化生产；半合成方法中的前体物质浆果赤霉素Ⅲ（Baccatin Ⅲ）和10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ（10-Deacetylbaccatin Ⅲ）仍然是从红豆杉中提取的，所以更难以实现工业化生产[]。 近年来，国内外学者进行了大量红豆杉愈伤组织培养和细胞悬浮培养研究，培养的红豆杉细胞系已超过10个，其中大部分已证实产生紫杉醇，但是离体培养生产紫杉醇实现工业化生产的关键问题难以突破，例如，培养物生物量小，紫杉醇产率较低，生产周期长，并且还需要保持细胞生长与生产特性的稳定等等[]。Christen[]首次利用