中国南方红豆杉内生真菌产紫杉醇的菌种的筛选.docVIP

附录A 中国南方红豆杉内生真菌产紫杉醇的菌种的筛选 [摘 要]利用无菌技术一共从中国南方红豆杉中分离出38株内生真菌。提取所分离的内生真菌的基因组DNA，并用聚合酶链式反应对其基因进行分析表明TS基因是生物合成紫杉醇途径的限速酶合成基因。在38个所分离的菌种中，共有12个菌种在PCR反应中显示了TS基因的活性。结果，用柱层析分离，用高效液相和质谱进行检测，表明具有TS活性基因的菌种的发酵液和菌丝体中可以得到紫杉醇和其相关的化合物。检测结果表明，有三株菌种产紫杉醇和其相关化合物的量能够达到检测水平。这项研究表明，应用分子生物学方法检测ts基因是初步筛选产紫杉醇和其相关化合物的内生真菌的有效的方法，能够显著的改善筛选效率。 引言 自从1993年，Taxomyces andreanae and Pestalotiopsis microspora 就研究产紫杉醇的内生真菌，论证有机体而不是紫杉能够产生紫杉醇[1-3]。现在，全世界的科学家都在努力第分离内生真菌和研究它们的自然产物[4]。在过去几十年中，科学家们成功地从各种不同的红豆杉及其相关的植物中分离出能够产生紫杉醇的内生真菌[5-8]。在分离和筛选产紫杉醇的内生真菌的过程中，很多科学家用相似的方法分离真菌。首先是内生真菌从植物材料中成功地分离出内生真菌；然后从这些内生真菌中鉴别出能够产生紫杉醇的内生真菌；最后，利用由分馏法和分光镜法衍