3.1DNA重组技术的基本工具上课.ppt

无论真核细胞还是原核细胞其基因均有编码区（能转录mRNA,进而编码蛋白质)与非编码区(不能转录mRNA,不能编码蛋白质），真核细胞基因的编码区可分为外显子（可编码蛋白质)、内含子(不能编码蛋白质）。 而密码子位于mRNA上，起始密码子有AUG（决定甲硫氨酸）和GUG（决定缬氨酸），而终止密码子则有UAA、UAG、UGA，不决定氨基酸 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）载体的作用 将外源基因转移到受体细胞中去。 运载体对外源基因进行大量复制。 （2）作为载体必须具备的条件 能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体 细胞有害。 大小应适合，便于提取和操作 记一记 （3）常用的载体 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 常用的载体：质粒 复制起始的一段序列 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物细胞中。是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA或细胞核之外自我复制的很小的双链环状DNA分子 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 议一议 2、能否用SARS病毒作为基因载体？ 3、作为载体，若没有切割位点将怎样？ 4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？ 5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？ 1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 双链DNA 不能 不能进行DNA的重组 载体上应有标记基因 可能造成基因丢失 思考与探究 1.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC… ?? …G??????????? …TG??????? CG…（4）…G????? (5)????G…? (6) …GC ????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG (7) GT…??????? (8)AATTC… ???? CA…????????????? G… 你能用DNA连接酶将它们连接起来？ 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 * 2、为什么限制酶不能将自己的DNA分子剪切掉？ 1、DNA分子不具备该种限制酶的识别切割序列； 2、通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能切开。 4.网上查询：DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 * 真核生物的基因由编码区和非编码区组成，两边是非编码区（非编码序列）、中间是编码区（编码序列）。而中间的编码区也由编码序列和非编码序列相间排列组成，其中的编码序列称外显子、而非编码序列称内含子。 原核生物的基因也有编码区、非编码区，但是编码区内是连续的编码区列。（注意在原核生物基因中，没有外显子和内含子的概念，即你不能说原核生物的编码区全是外显子） 这样的基因转录是，先以编码区其中一条链为模板合成mRNA，这就是前体mRNA，然后有些酶将那些内含子对应的序列切去，把外显子对应的mRNA的序列链接在一起，这就是成熟的mRNA，这就是翻译蛋白质的直接模板了。核糖体结合在上面，并沿其滑动。当遇到AUG（真核生物的起始密码子）或者GUG（原核生物的起始密码子）时，肽链的合成开始，当遇到UAA、UAG、UGA（终止密码子）的时候，肽链合成终止。 一句话：编码区（外显子、内含子）和非编码区是基因的结构。起始、终止密码子是mRNA的三个为一组的碱基。 专题1 基因工程 一、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的生物类型和生物产品 剪切 → 拼