第二节 原生质体培养.pptVIP

第二节 原生质体培养 一、培养基 二、培养方法 4、饲养层培养 二、融合方法 (一)无机盐诱导融合: NaNO3法 1972年： Carlson诱导原生质体融合获得首例杂种植株粉蓝烟草和朗氏烟草体细胞杂种。 （二）高pH-高Ca离子法 （三）PEG法 （四）PEG结合高钙-高pH诱导法 最为常用。 具体做法：在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液，摇匀，静置---滴加高钙-高pH溶液，摇匀，静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞 异硫氰酸荧光素（FITC）：绿色 异硫氰酸罗丹明（RITC）：红色 本章小结： (1) 原生质体培养的意义：(1)再生植株； (2)用于远缘体细胞融合，进行体细胞杂交。 (2) 原生质体分离方法：机械分离法、酶法分离。 (3)酶的种类及特点 (4)原生质体的纯化方法：离心沉淀法；漂浮法；界面法。 (5)原生质体活力的测定：形态识别；染色识别。 本章小结： （6）原生质体培养方法：液体浅层培养；平板法培养；悬滴法培养；双层培养法；饲喂层培养 （7）原生质体融合的方法：无机盐诱导融合；聚乙二醇与高pH高钙相结合的诱导融合；电融合技术。 （8）杂种细胞的筛选与鉴定：互补选择；机械分离杂种 细胞法；双荧光标记选择法 （9）杂种植株的鉴定：形态学鉴定；细胞学观察；DNA内切图谱分析；同工酶