性病实验室检测的技术标准和操作规程.doc

生殖医学中心 性病实验室检测操作规程 参照标准：乌鲁木齐市性病医疗机构规范化管理资料汇编，2002.11.07，38 目 录 一、淋病检查的实验室技术 2 (一)分泌物涂片检查 2 （二）淋球菌的分离培养 3 （三）淋球菌的保存 4 （四）氧化酶试验 5 二、支原体的检测 5 三、衣原体检查 6 四、梅毒的实验室检测 7 (一)直接镜检 8 （二）非特异性梅毒螺旋体试验 8 五、TPHA梅毒螺旋体血凝试验 9 一、淋病检查的实验室技术 (一)分泌物涂片检查 急性淋菌性尿道炎患者常有大量脓性分泌物。在有些脓细胞内可见革兰氏染色呈阴性的双球菌，椭圆或球形，常成双排列。因形态特殊，可取患者尿道分泌物制成涂片后染色，检查有无典型细胞内革兰阴性双球菌，可作为初步诊断的依据。 标本采集 尿道分泌物、宫颈粘液、尿的离心沉淀物。 涂片镜检 涂片后，待自然干燥后，加热固定，行革兰染色，油镜观察。 结果 在急性患者的尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞，有些细胞中吞噬有淋球菌。多数多形核白细胞中并不含淋菌，但不少细胞中常含有1对或数对，甚至20~30对。淋球菌常存在于细胞浆内。 在病期较长或经过治疗的淋病患者的涂片中淋球菌比较少，有时呈单个、四联和八叠状，且常位于细胞外。 对有些细菌难以下结论时，需进行培养和鉴定。 注意事项 1．涂片时不要用力涂擦，而应将棉拭在玻片上轻轻滚动。涂擦过重，细胞容易破裂变形，致细菌从胞内溢出。 2．涂片厚薄适宜。过厚，加之染色过程中脱色时间不足，革兰染色易呈紫色。因此，脱色时间要视涂片厚薄而定。 3．固定涂片时，迅速通过火焰2~3次，避免加热过度使细胞变形。热度以不烫手为宜。 4．不推荐用涂片检查来诊断淋菌的直肠和咽部的感染，也不推荐用来作判愈。 方法评价 涂片检查方法简便、有效、价格低廉且有一定的敏感性和特异性。但其特异性随取材部位的不同而有所不同。男性尿道取材特异性较高，而从女性子宫颈取材特异性较低。因此，世界卫生组织不推荐用涂片法来诊断女性患者。 革兰染色 （一）操作步骤 细菌涂片须经火焰固定。 先用甲液滴加在标本上，加的量以盖住标本为准，再加等的乙液，混匀，染3-5秒钏，用自来水从玻片的一端冲去染液，甩干。 滴加适量碱性碘液在标本上，3-5秒后，自来水冲洗，甩干。 丙酮酒精脱色，脱色的标本为：当丙酮酒精滴加在标本上，不出现蓝色或淡紫色为宜。 用碱性复红复染，覆盖标本，3-5秒后，自来水冲洗，待其自然干燥或用吸水纸吸干，油镜观察。 （二）革兰染液 1．碱性结晶紫液 甲液 结晶紫 2.5g 蒸馏水 1000ml 结晶紫置于研钵中,加入少量的蒸馏水,并使之溶解,待其完全溶解后,移入所备容器中,并用蒸馏水将研钵中的染料尽量洗下,补充蒸馏水到1000ml。 乙液：NaHCO3 12.5g 蒸馏水 1000ml 2．碱性碘液 碘 2g NaOH（1mol/L） 10ml 蒸馏水 90ml 先将碘与NaOH置研钵中研磨，使之完全溶解后，加入蒸馏水混合即成。 3．丙酮酒精 95%的酒精75ml，丙酮25ml，将二者混合即成。 4．碱性复红水溶液 饱和石碳酸复红酒精溶液用蒸馏水稀释10倍。 （二）淋球菌的分离培养 如果标本中有淋球菌，则在合适的培养基上经培养后可长成菌落。各种细菌在培养基上生长的菌落形态各不相同。根据菌落的大小，表面高起或扁平、光泽、色素和边缘的情况等，作为细菌鉴定的标准。 1．方法 （1）取材 培养要取得成功，取材部位和方法要准确。由男性患者前尿道取材时，应该用细小拭子伸入尿道口2~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女性患者宫颈取材时，应先用温水湿润扩阴器（不能用液体石蜡等润滑油）。应让棉拭充分吸附分泌物。从直肠取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，如果棉拭碰到粪便，应换一个棉拭重取。检查淋菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。为了提高阳性率，可同时取二份标本进行培养。 （2）培养基 由于淋球菌的营养要求复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌和生长所需的多种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。为抑制杂菌，在培养基中可加入少量抗菌素和淋球菌增菌剂，使大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在平皿中几乎呈纯培养，从而提高分离的阳性率。 （3）培养条件 淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，取材后应立即接种。接种的平皿应先放在37℃温箱中预温。 培养的最适温度为35℃~36℃，超过38.5℃或低于30℃便生长不良。 最初从人体分离时，需用5%二氧