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结核病疫苗的研究进展 发布日期：2011-12-21 浏览次数:25 字号：[?大?中?小?] 　　????结核病是严重影响人类健康的慢性传染病。由于移民、吸毒、人类免疫缺陷病毒(HIV) 与结核杆菌伴发感染和结核杆菌耐多药性等因素，全球每1 秒钟就有1 个新感染者出现，每年新发结核病人达850 万，300 万人死于结核病。目前，全球已有20 亿人感染结核菌。结核病不仅已成为21 世纪严重危害人类健康的公共卫生问题，而且也已成为严重的社会问题。这给全球结核病防治工作提出了新的挑战。结核病的严峻形势促使全球基金机构和科学家探讨新的方法来治疗和预防结核病。显然，发明一种能有效预防结核杆菌感染的疫苗是控制结核病的关键。　　卡介苗(BCG) 是惟一获准用于预防结核病的疫苗。BCG能有效预防儿童结核病，但不能预防成人结核病复发。即使在儿童，BCG的免疫保护效果在不同地区不同种族中也存在显著差异(0～80%)。第一次成功接种以后，BCG菌株分发到世界各地，几十年来一直在不同地区的实验室中进行增殖，与原始亲本株相比，表型和基因型均有差异，表明BCG在传代过程丢失了许多基因。BCG的无效可能与丢失了许多保护性免疫基因有关。比较基因组学已证实BCG中缺失许多基因。现已鉴定出一些称为RD1～RD16以及包含129 个开放读码框架的区域。这些基因存在于有毒力的分支杆菌中而在BCG减毒和反复传代时缺失。RD1 区是所有缺失域中最具特征性的。该基因片段在所有BCG亚株和大部分环境分支杆菌中缺失，但在结核杆菌复合群的各菌株中存在。另外，环境分支杆菌致敏也是影响BCG效力的一个重要因素。接触环境分支杆菌可获得不同水平的抗结核病感染的保护作用，但不足以控制以后毒力更强的结核杆菌的攻击，却完全阻断了由BCG 正常提供的抗结核杆菌攻击的保护作用。除效力不一致外，标化不足也是其主要缺点之一。同时，BCG作为一种减毒的活疫苗，如果应用于免疫功能有缺陷的患者如HIV 感染者，可能会使BCG在患者体内播散而导致患者死亡。BCG的局限性推动了抗结核病新疫苗的开发。发展安全、高效的新型结核病疫苗势在必行。　　1997 年以来，美国国立卫生研究院(NIH) Orme 等建立了小剂量气溶胶攻击的原发性肺结核病小鼠和豚鼠模型，并利用这些模型对170 多种候选疫苗进行了试验。该院用于结核病研究的经费，从1990 年的340万美元，增加到2000 年的近8000万美元。目前世界范围内正在开发的结核病疫苗包括减毒或增强的活疫苗、全菌体灭活疫苗、亚单位疫苗、DNA 疫苗、初免-加强疫苗等。　　一、减毒或增强的活疫苗　　活疫苗的优点是可使机体免疫系统受到更接近自然感染途径的刺激，而不会引起病理损害。但同BCG一样，影响以PPD 为抗原的结核病血清学免疫诊断结果。减毒活疫苗沿用了构建BCG的思路。一是通过基因置换和转座子诱变使单个基因位点失活来制备疫苗。使用这种方法已生产出营养缺陷型候选疫苗株。这种营养缺陷型株能导致哺乳动物宿主感染，但复制时间有限，与BCG有相同的保护作用。这预示着免疫功能抑制人群有了较为安全的活疫苗的希望。二是诱导菌体突变，导致毒力减低来构建减毒活疫苗。由于BCG传代过程丢失了RD1 区，导致保护力下降，因此重新改造结核杆菌，使其RD1 区缺失，用结核杆菌RD1 缺失株来验证它是否减毒，在人体存在的时间是否足以引起保护性免疫应答，诱导的免疫应答是否比BCG强。另一种减毒方法是前细胞凋亡法，设计用作疫苗候选株的结核杆菌或BCG突变株的超氧化物歧化酶活性减弱，感染细胞时，细胞凋亡加速，经MHC - I类抗原递呈增加，从而增强CD8+ 介导的杀菌作用。这些理论已得到初步验证。　　增强活疫苗的通常方法是，在BCG中引入传代过程中丢失的保护性抗原，或者引入哺乳动物细胞因子、荧光素酶等，以增强BCG的免疫原性。在BCG中引入能够诱导宿主产生细胞免疫的结核杆菌分泌性蛋白保护抗原Ag85B，免疫结果显示，其肺和脾内的细菌数与BCG免疫组相比，显著减少。由RD1 区基因编码的结核分支杆菌早期分泌性抗原性靶(ESAT- 6) ，是从结核杆菌短期培养滤液(ST - CF) 中纯化分离的一种低分子量分泌性蛋白，具有较强的细胞免疫活性，可致结核杆菌再感染小鼠的记快效应T 细胞增殖及IFN - r 早期大量产生，在BCG各菌株中缺乏其编码基因。把RD1 区重新导入BCG，表达的蛋白质同有毒力的牛型分支杆菌和结核杆菌几乎完全相同。与BCG的免疫效果相比，可产生更多高效价的特异性抗体和更为强烈的细胞免疫反应。因此从RD1～RD16中选择基因重新导入BCG ，可能是增强现有BCG保护效力的更为有效的途径。Murray 等分别构建了能分泌IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r、GM-CSF