苯酚_硫酸法测定百合多糖中糖含量.pdfVIP

科技信息 高校理科研究 苯酚—硫酸法测定百合多糖中糖含量 湖州师范学院求真学院08 级生物工程专业 金凤慈 湖州师范学院生命科学学院 闵莉静 ［摘 要］目的：寻找一种操作简单，结果可靠的检测百合多糖中糖含量的定量分析方法。方法：本文采用水煮醇沉法初步提取百合 多糖，用苯酚—硫酸显色法测定百合多糖含量并计算回收率。结果：通过水煮醇沉并纯化干燥后得到白色的百合多糖，经苯酚- 硫 酸法测定得到糖含量约为43.67%，回收率为98.60 %。结论：苯酚—硫酸法测定百合多糖含量，实验操作简单，实验结果可靠。 ［关键词］百合多糖 苯酚- 硫酸法 回收率 1.引言 r/min 离心10 min，弃上清，收集沉淀。 多糖的检测方法一般可分为两大类，一类是直接测定多糖本身，如 加水溶解沉淀，Savage 法除蛋白 。 糖液于透析袋 (MW： 高效液相色谱法和酶法；另一类是通过显色反应测定吸光度值，即比色 8,000- 14,400)中透析48h ，吸取上清液，4000 r/min 离心6 min，取上清， [2] 法，如水杨酸法、斐林法、苯酚一硫酸法、蒽酮一硫酸法等。其中，苯酚- 烘干得粗多糖 。 硫酸法、蒽酮- 硫酸法由于方法简单、快速，实验成本较低，且无需多糖 将百合粗多糖过Sephadex HW- 40C 柱，收集馏分，冷冻干燥得纯百 [1] 纯品等优点被广泛采用 。 合多糖。 糖类化合物与强无机酸混合加热会脱水生成糖醛或其衍生物，这 2.5 苯酚—硫酸显色法测定糖含量标准工作曲线的绘制 种物质能与苯酚、蒽酮（anthone）、а－萘酚、间苯二酚或苔黑酚（orici- 精确称取 0.0200g 葡萄糖标准品置于 500.0mL 容量瓶中配成 nol ，即5- 甲基－1,3－间苯二酚）等缩合并显出颜色，常用来鉴别糖类。 40mg/L 浓度的储备液。分别移取上述溶液 10.00、15.00、20.00、25.00、 我们选用苯酚－浓硫酸法测定还原性糖类含量。反应方程式如图1 所 30.00、35.00、40.00 、45.00mL 于50mL 容量瓶中定容，得一系列浓度为 示。 8、12、16、20、24、28、32、36mg/L 的标准溶液。 第一步：糖类遇浓硫酸脱水： 依次移取上述不同浓度的标准溶液2.00mL 于25mL 比色管中，分 别加入1.00mL 6%苯酚溶液，5.00mL 浓硫酸，静置 10min，摇匀，室温放 置20min 。以蒸馏水作空白，于490nm 处测吸光度，作标准工作曲线。 2.6 苯酚—硫酸显色法测定百合多糖含量 准确称取百合多糖样品0.0500g，溶解，并于100.0mL 的容量瓶中 定容，配成0.5g/L 的