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实验四二次生长曲线.ppt
实验四 微生物二展生长曲线 一、基本原理 典型生长曲线 二展曲线（二次生长曲线） 微生物生长测定方法 二、实验器材 菌种：大肠杆菌 培养基： 菌种活化培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基 生长培养基：K2HPO4 0.7g，KH2PO4 0.3g，MgSO4.7H2O 0.1g，(NH4)2SO4 1g，NaCl 0.5g，葡萄糖 0.5g，乳糖 1g，蒸馏水 1000ml 仪器或其他用具：比色杯，分光光度计 四、操作步骤 取培养24h的E.coli斜面加5ml无菌水洗下，接种于肉膏蛋白胨培养基中，摇床活化3h，供实验接种用。 配制生长培养基 ，用250ml三角瓶装置50ml，共装42瓶。加好纱布塞，115OC灭菌25分钟。 接种 将上述准备好的处于对数生长期的大肠杆菌悬液每瓶接1ml。 摇床振荡培养 将发酵瓶置37℃恒温室摇床振荡培养3小时，按编号顺序分别按下面时间取出，每次取3瓶(即3个重复)，用721型分光光度计测OD450nm ，计算其平均值，填下表。 四、结果与讨论 以生长时间为横坐标，光密度（OD值）为纵坐标绘制生长曲线。 结合诱导酶形成过程解释E.coli二展生长曲线。 实验操作中如何保证菌体快速增长？ 附录：牛肉膏蛋白胨液体培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 水 1000ml pH 7.0-7.2 14周（5月20日）实验操作考试 考核内容：微生物生理学基本实验操作、原理及注意事项 * * * * * * * * 延滞期、对数生长期、稳定期、衰亡期 培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一条双峰的生长曲线。 第一类：如葡萄糖、甘露糖、果糖、蔗糖或甘露醇 第二类：如麦芽糖、阿拉伯糖、山梨醇或环己六醇 干重法 比浊法 生理指标法 稀释平板计数法 血球计数法 5:00 40,41,42 6组 2:40 19,20,21 3组 4:30 37,38,39 6组 2:35 16,17,18 3组 4:00 34,35,36 5组 2:30 13,14,15 2组 3:30 31,32,33 5组 2:25 10,11,12 2组 3:00 28,29,30 5组 2:20 7,8,9 1组 2:50 25,26,27 4组 2 4,5,6 1组 2:45 22,23,24 4组 0 1,2,3 1组 OD值 再培养时间 瓶号 负责人 OD值 再培养时间 瓶号 负责人 2－4组每隔5分钟取样，每次3瓶，分别测定OD值，计算平均值。
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